Утвержден и введен в действие
Приказом Федерального агентства
по техническому регулированию
и метрологии
от 9 августа 2012 г. N 222-ст
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
КОРМА ДЛЯ ЖИВОТНЫХ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ФИТАЗЫ
Animal feeding stuffs. Determination of phytase activity
ISO 30024:2009
Animal feeding stuffs - Determination of phytase activity
(IDT)
ГОСТ Р ИСО 30024-2012
Группа С19
ОКС 65.120
ОКСТУ 9209
9709
Дата введения
1 июля 2013 года
Предисловие
1. Подготовлен ОАО "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (ОАО "ВНИИС") на основе аутентичного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в пункте 4.
2. Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 004 "Комбикорма, белково-витаминно-минеральные концентраты, премиксы".
3. Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 9 августа 2012 г. N 222-ст.
4. Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ИСО 30024:2009 "Корма для животных. Определение активности фитазы" (ISO 30024:2009 "Animal feeding stuffs - Determination of phytase activity").
5. Введен впервые.
Правила применения настоящего стандарта установлены в ГОСТ Р 1.0-2012 (раздел 8). Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (gost.ru).
Введение
Настоящий национальный стандарт был разработан с целью количественного определения активности фитазы в пробах кормов, с тем чтобы предоставить возможность контроля содержания фитазы в кормовых продуктах для животных.
Вместе с тем данный метод не допускается применять для оценки эффективности фитазы в живых организмах.
1. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
Настоящий стандарт устанавливает метод определения активности фитазы в кормах.
Метод не позволяет отдельно идентифицировать фитазу, добавленную в качестве кормовой добавки.
Метод не применяют для оценки или сравнения эффективности фитазы в живых организмах.
Примечание. Метод разработан на основе имеющихся в настоящее время видов фитазы [Е1600 (КФ <1>) 3.1.3.8, 3-фитаза), Е1614 (КФ 3.1.3.26, 4-фитаза) и Е1640 (КФ 3.1.3.26, 4-фитаза)].
--------------------------------
<1> Классификация ферментов.
2. ТЕРМИНЫ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ
В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:
2.1. Единица активности фитазы (ед.) [phytase unit (U)]: количество фермента, которое высвобождает 1 мкмоль неорганического фосфата из фитата за 1 мин в условиях реакций, установленных в настоящем стандарте.
3. СУЩНОСТЬ МЕТОДА
Фитаза высвобождает фосфат из субстрата мио-инозитолгексаксифосфата (фитата). Освободившийся неорганический фосфат определяют путем образования желтого комплекса с кислотным реактивом молибдата/ванадата. Оптическую плотность желтого комплекса измеряют при длине волны 415 нм, выделившийся неорганический фосфат количественно определяют при помощи градуировочной кривой, построенной на основе эталонных растворов фосфата.
4. РЕАКТИВЫ
В процессе анализа, если не указано иное, используют реактивы только признанной аналитической степени чистоты и дистиллированную или деминерализованную воду, либо воду эквивалентной степени чистоты, не содержащую фосфатов.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ. Настоящий метод предусматривает использование опасных веществ. Следует соблюдать действующие нормы для потенциально опасных химических веществ с целью минимизации рисков для организационной, технической и личной безопасности.
4.1. Аммиака раствор, с массовой долей 25%, .
4.2. Аммония гептамолибдата тетрагидрат, .
4.3. Аммония монованадат, .
4.4. Кислота соляная, с массовой долей 25%, HCl.
4.5. Кислота азотная, с массовой долей 65%, .
4.6. Калия дигидрофосфат, .
4.7. Фитат, фитиновой кислоты додеканатриевая соль, , из риса, <1>.
4.8. Натрия ацетата тригидрат, .
4.9. Полисорбат 20 <1>.
--------------------------------
<1> Это пример подходящего продукта, имеющегося в продаже. Данная информация приводится для удобства пользователей настоящего стандарта и не накладывает обязательства применять данный продукт.
4.10. Разбавленная азотная кислота
Разбавляют один объем азотной кислоты с массовой долей 65% (4.5) двумя объемами воды. Хранят при комнатной температуре. Максимальный срок хранения не ограничен.
4.11. Реактив аммония гептамолибдат
Растворяют 100,0 г аммония гептамолибдата тетрагидрата (4.2) в 800 см3 воды. Добавляют 10 см3 раствора аммиака с массовой долей 25% (4.1) и доводят объем водой до 1000 см3. Хранят при комнатной температуре в темноте. Максимальный срок хранения - 2 мес.
4.12. Реактив аммония ванадат
Полностью растворяют 2,35 г аммония монованадата (4.3) в 400 см3 воды при температуре от 50 °C до 60 °C. Добавляют 20 см3 разбавленной азотной кислоты (4.10) и доводят объем водой до 1000 см3. Хранят при комнатной температуре в темноте. Максимальный срок хранения - 2 мес.
4.13. Стоп-реагент молибдат/ванадат
Смешивают один объем реактива аммония ванадата (4.12) и один объем реактива аммония гептамолибдата (4.11) и добавляют два объема разбавленной азотной кислоты (4.10). Перемешивают и хранят при комнатной температуре. Максимальный срок хранения - один день.
4.14. Полисорбат 20, с массовой долей 10%
10,0 г полисорбата 20 (4.9) растворяют в воде и доводят объем водой до 100 см3. Хранят при комнатной температуре. Максимальный срок хранения - 6 мес.
4.15. Ацетатный буфер, pH 5,5, концентрацией 0,25 моль/дм3
34,0 г натрия ацетата тригидрата (4.8) растворяют приблизительно в 900 см3 воды. Доводят pH до 5,50 +/- 0,02 при помощи раствора соляной кислоты с массовой долей 25% (4.4) и доводят раствор водой до 1000 см3. Хранят при комнатной температуре. Максимальный срок хранения - две недели.
4.16. Ацетатный буфер с полисорбатом 20 с массовой долей 0,01%, pH 5,5, концентрацией 0,25 моль/дм3
34,0 г натрия ацетата тригидрата (4.8) растворяют приблизительно в 900 см3 воды. Доводят pH до 5,50 +/- 0,02 при помощи раствора соляной кислоты с массовой долей 25% (4.4). Добавляют 1 см3 раствора полисорбата 20 с массовой долей 10% (4.14) и доводят объем водой до 1000 см3. Хранят при комнатной температуре. Максимальный срок хранения - две недели.
4.17. Ацетатный буфер с полисорбатом 20 с массовой долей 0,01%, pH 5,5, концентрацией 0,50 моль/дм3
68,0 г натрия ацетата тригидрата (4.8) растворяют приблизительно в 900 см3 воды. Доводят pH до 5,50 +/- 0,02 при помощи раствора соляной кислоты с массовой долей 25% (4.4). Добавляют 1 см3 раствора полисорбата 20 с массовой долей 10% (4.14) и доводят объем водой до 1000 см3. Хранят при комнатной температуре. Максимальный срок хранения - две недели.
4.18. Раствор субстрата фитата, концентрацией 7,5 ммоль/дм3 (конечная концентрация в реакции - 5 ммоль/дм3)
2,00 г додеканатрия фитата (4.7), содержание неорганического фосфора в котором <= 0,1% по массе (см. 9.3), растворяют приблизительно в 200 см3 ацетатного буфера (4.15). Доводят pH до 5,50 +/- 0,02 при помощи раствора соляной кислоты с массовой долей 25% (4.4) и доводят раствор ацетатным буфером (4.15) до 250 см3. Максимальный срок хранения - две недели при температуре 4 °C.
4.19. Исходный эталонный раствор фосфата концентрацией 50 ммоль/дм3
Высушивают приблизительно 10 г калия дигидрофосфата (4.6) при температуре 105 °C в течение 2 ч и помещают в эксикатор. Взвешивают приблизительно 682 мг высушенного калия дигидрофосфата, количественно переносят его в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят объем до 100 см3 ацетатным буфером концентрацией 0,25 моль/дм3 с полисорбатом 20 с массовой долей 0,01% (4.16). Рассчитывают точную концентрацию исходного эталонного раствора фосфата. Хранят при комнатной температуре. Максимальный срок хранения - две недели.
4.20. Исходный эталонный раствор фитазы
Взвешивают от 100,0 до 300,0 мг образца фитазы, количественно переносят ее в мерную колбу вместимостью 100 см3 и растворяют в 100 см3 ацетатного буфера концентрацией 0,25 моль/дм3 с полисорбатом 20 с массовой долей 0,01% (4.16). Перемешивают в течение 15 - 45 мин. Хранят при комнатной температуре. Максимальный срок хранения - один день.
5. ОБОРУДОВАНИЕ
Используют обычное лабораторное оборудование, в частности нижеприведенное.
5.1. Баня водяная с регулируемой температурой (со вставными секциями для пробирок вместимостью 2 см3).
5.2. pH-метр с возможностью считывания показаний по меньшей мере до двух десятичных знаков.
5.3. Мешалки магнитные (мощностью >= 20 Вт).
5.4. Вертушки магнитные овальные (40 мм x 20 мм).
Для просмотра документа целиком скачайте его >>>
