Введен в действие
Приказом Федерального агентства
по техническому регулированию
и метрологии
от 29 ноября 2012 г. N 1777-ст
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МОЛОКО СУХОЕ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ МОЛОЧНОЙ КИСЛОТЫ И ЛАКТАТОВ
Dried milk. Determination of content of lactic
acid and lactates
(ISO 8069:2005, MOD)
ГОСТ 31716-2012
(ISO 8069:2005)
Группа Н19
МКС 67.100.10
Дата введения
1 июля 2013 года
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены".
Сведения о стандарте
1. Подготовлен Московской государственной академией пищевых производств на основе аутентичного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в пункте 4.
2. Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии.
3. Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (Протокол N 51 от 1 октября 2012 г.).
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Беларусь BY Госстандарт Республики Беларусь
Казахстан KZ Госстандарт Республики Казахстан
Кыргызстан KG Кыргызстандарт
Молдова MD Молдова-Стандарт
Российская Федерация RU Росстандарт
Таджикистан TJ Таджикстандарт
4. Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. N 1777-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31716-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г.
5. Настоящий стандарт модифицирован по отношению к международному стандарту ISO 8069:2005 Dried milk - Determination of content of lactic acid and lactates (Молоко сухое. Определение содержания молочной кислоты и лактатов) путем изменения отдельных слов, ссылок, которые выделены в тексте курсивом.
Официальные экземпляры международного стандарта, на основе которого подготовлен (разработан) настоящий межгосударственный стандарт, и международных стандартов, на которые даны ссылки, имеются в Росстандарте.
Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным международным стандартам приведены в дополнительном Приложении ДА.
Степень соответствия - модифицированная (MOD).
Стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 51196-2010 (ИСО 8069:2005).
6. Введен впервые.
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта публикуется в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты".
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты".
1. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
Настоящий стандарт устанавливает ферментативный метод селективного определения в сухом молоке содержания D- и L-изомеров молочной кислоты и ее солей лактатов.
2. НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения
ГОСТ ИСО 5725-2-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений
ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу
Примечание. При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю "Национальные стандарты", составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3. ТЕРМИНЫ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ
В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:
3.1. Содержание L- и D-молочной кислоты и L- и D-лактатов: массовая доля молочной кислоты и лактатов, определенная в соответствии с настоящим стандартом и выраженная в миллиграммах молочной кислоты на 100 г сухих обезжиренных веществ.
4. СУЩНОСТЬ МЕТОДА
Навеску пробы сухого молока растворяют в теплой воде, далее фильтруют. В полученный фильтрат вносят следующие биохимические реактивы - ферменты, коферменты и активаторы, которые добавляют одновременно, но в указанной последовательности для проведения следующих реакций:
a) для окисления L- и D-молочной кислоты, L- и D-лактата в присутствии никотинамидадениндинуклеотида до пирувата и преобразования в восстановленную форму НАДН - L-лактатдегидрогеназу (L-ЛДГ) и D-лактатдегидрогеназу (D-ЛДГ);
b) для преобразования в присутствии L-глутамата пирувата в L-аланин и L-глутамата в -кетоглутарат - глутамат-пируват-трансаминазу (ГПТ).
Количество образовавшегося НАДН, которое пропорционально содержанию L- и D-молочной кислоты и L- и D-лактатов, определяют спектрофотометрически измерением оптической плотности инкубационной смеси при длине волны 340 нм.
5. РЕАКТИВЫ
Используют реактивы только установленной аналитической степени чистоты. Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть бидистиллированной, полученной на стеклянном оборудовании, а вода, используемая для других целей, должна быть дистиллированной.
5.1. Раствор калия гексацианоферрата(II),
Растворяют в воде 35,9 г тригидрата калия гексацианоферрата (II). Разбавляют водой до 1000 см3 и перемешивают.
5.2. Раствор цинка сульфата,
Растворяют в воде 71,8 г гептагидрата сульфата цинка. Разбавляют водой до 1000 см3 и перемешивают.
5.3. Растворы натрия гидроксида
5.3.1. Раствор I натрия гидроксида, c (NaOH) = 10 моль/дм3
Растворяют в воде 400 г натрия гидроксида. Разбавляют водой до 1000 см3 и перемешивают.
5.3.2. Раствор II натрия гидроксида, c (NaOH) = 0,1 моль/дм3
Растворяют 4,0 г натрия гидроксида в воде. Разбавляют водой до 1000 см3 и перемешивают.
5.4. Раствор глицерина , с объемной долей глицерина 50%
5.5. Раствор аммония сульфата,
Растворяют 422,84 г аммония сульфата в воде. Разбавляют водой до 1000 см3 и перемешивают.
5.6. Буферный раствор, pH 10
Растворяют 7,92 г глицилглицина и 1,47 г L-глутаминовой кислоты в 80 см3 воды. Устанавливают pH (10,0 +/- 0,1) при 20 °C раствором I гидроксида натрия (см. 5.3.1) и при постоянном перемешивании доводят объем раствора водой до 100 см3.
Раствор хранят не более 3 мес при температуре от 0 °C до 5 °C.
5.7. Раствор никотинамид-аденин-динуклеотида (НАД)
Растворяют 350 мг никотинамид-аденин-динуклеотида в 10 см3 воды.
Полученный раствор хранят в течение 1 мес при температуре от 0 °C до 5 °C. Во время использования сосуд с раствором должен быть погружен в емкость с дробленым льдом.
5.8. L-лактатдегидрогеназа (L-ЛДГ), из суспензии мышцы свиньи
10 мг суспензии L-лактатдегидрогеназы растворяют в 1 см3 раствора глицерина (5.4). pH полученной суспензии должен быть около 7. Если удельная активность L-ЛДГ менее 5500 ед./см3, проводят повторное приготовление раствора фермента согласно вышеприведенным указаниям.
Раствор L-ЛДГ стабилен в течение 12 мес при хранении при температуре от 0 °C до 5 °C.
Во время использования раствора L-ЛДГ согласно разделу 8 емкость с ферментом охлаждают и выдерживают в ледяной бане.
5.9. D-лактатдегидрогеназа (D-ЛДГ) (из культуральной жидкости Lactobacillus leichmannii)
5 мг суспензии D-ЛДГ растворяют в 1 см3 раствора сульфата аммония (см. 5.5). pH полученной суспензии должен быть около 6. Удельная активность D-ЛДГ должна быть не менее 1500 ед./см3 при 25 °C.
Если это не так, приготовляют другую суспензию D-ЛДГ.
Суспензия D-ЛДГ стабильна в течение 12 мес при хранении при температуре от 0 °C до 5 °C.
Во время использования раствора L-ЛДГ согласно разделу 8 емкость с ферментом охлаждают и выдерживают в ледяной бане.
5.10. Глутамат-пируват-трансаминаза (ГПТ), из свиного сердца
20 мг суспензии ГПТ растворяют в 1,0 см3 раствора сульфата аммония (см. 5.5). pH полученной суспензии должен быть около 7. Удельная активность суспензии глутамат-пируват-трансаминазы должна быть не менее 1600 ед./см3 при 25 °C. Если это не так, приготовляют другую суспензию ГПТ.
Добавляют 1,0 см3 раствора сульфата аммония (см. 5.5) к 1 см3 суспензии с 20 мг ГПТ и перемешивают. Центрифугируют полученные 2,0 см3 суспензии, содержащей 10 мг ГПТ/см3, при радиальном ускорении 4000 g в течение 10 мин. Переносят 1,0 см3 прозрачной надосадочной жидкости, удаляют оставшиеся
Для просмотра документа целиком скачайте его >>>
