Утвержден и введен в действие
Приказом Федерального
агентства по техническому
регулированию и метрологии
от 26 ноября 2010 г. N 541-ст
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ФЕРМЕНТНЫЕ ПРЕПАРАТЫ ДЛЯ ПИЩЕВОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ
Enzyme preparations for food industry.
Method of determination of activity
ГОСТ Р 53973-2010
Группа Н09
ОКС 07.100.30
ОКСТУ 9291
Дата введения
1 января 2012 года
Предисловие
Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения".
Сведения о стандарте
1. Разработан Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом пищевой биотехнологии Россельхозакадемии (ГНУ ВНИИПБТ Россельхозакадемии).
2. Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 176 "Спиртовая, дрожжевая и ликеро-водочная продукция".
3. Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 26 ноября 2010 г. N 541-ст.
4. Введен впервые.
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет.
1. Область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод определения активности ферментных препаратов. Метод может быть использован для определения активности ферментных препаратов и ферментсодержащих смесей, применяемых в пищевой промышленности.
Примечание. активность исследуемых ферментных препаратов (ФП) обеспечивают ферменты эндо- и экзо-действия.
2. Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения
ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия
ГОСТ 83-79 Реактивы. Натрий углекислый. Технические условия
ГОСТ 199-78 Реактивы. Натрий уксуснокислый 3-водный. Технические условия
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 2603-79 Реактивы. Ацетон. Технические условия
ГОСТ 3765-78 Реактивы. Аммоний молибденовокислый. Технические условия
ГОСТ 4165-78 Реактивы. Медь (II) сернокислая 5-водная. Технические условия
ГОСТ 4166-76 Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия
ГОСТ 4201-79 Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия
ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия
ГОСТ 5845-79 Реактивы. Калий-натрий виннокислый 4-водный. Технические условия
ГОСТ 6038-79 Реактивы. D-глюкоза. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 13867-68 Продукты химические. Обозначение чистоты
ГОСТ 18481-81 Ареометры и цилиндры стеклянные. Общие технические условия
ГОСТ 20264.0-74 Препараты ферментные. Правила приемки и методы отбора проб
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
Примечание. При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3. Термины и определения
В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
3.1. Гидролиз: расщепление исходного соединения на более простые в присутствии молекул воды.
3.2. Ферментативный гидролиз: расщепление высокомолекулярных соединений при участии катализаторов белковой природы - гидролитических ферментов (гидролаз, класс 3 [1]).
3.3. Субстрат: соединение или вещество, на которое воздействует данный фермент.
3.4. : высокомолекулярное соединение, полимер, в котором остатки глюкозы соединены гликозидными связями; с водой образует коллоидные растворы.
3.5. Системные названия ферментов: названия, указывающие природу химической реакции, катализируемой данным ферментом, в соответствии с современной классификацией (КФ), принятой Международной комиссией по ферментам.
Примечание. Системные названия ферментов.
В группу эндодействия, катализирующих расщепление , входит 6 ферментов:
- (КФ 3.2.1.4) [1] - (целлюлаза) - гидролизует связи в целлюлозе, зерна;
- (КФ 3.2.1.6) - (ламинариназа) - катализирует расщепление внутренних или в ;
- (КФ 3.2.1.39) - - гидролизует преимущественно внутренние связи);
- (КФ 3.2.1.73) - лихеназа - гидролизует связи в , имеющих и ;
- (КФ 3.2.1.75) - - гидролизует внутри ;
- (КФ 3.2.1.71) - - гидролизует внутренние связи глюкана.
В группу экзодействия входят ферменты (КФ 3.22.1.21) - ; целлобиоза, расщепляют последнюю с нередуцирующего конца в , высвобождая .
4. Метод определения ферментативной активности
с субстратом
4.1. Характеристика метода
4.1.1. Метод основан на количественном определении редуцирующих (восстанавливающих) сахаров, образующихся в результате действия фермента на при температуре 50 °C.
4.1.2. За единицу активности принимают количество фермента, действующего на , из ячменя с высвобождением 1 мкмоля восстанавливающих сахаров (в глюкозном эквиваленте), образующихся за 1 мин при стандартных условиях (температура 50 °C и значение pH 5,0).
4.1.3. Содержание редуцирующих сахаров, образующихся в результате ферментативной реакции, определяют колориметрическим методом, основанным на взаимодействии сахаров с реактивом Шомоди - Нельсона [2]. В результате этой реакции образуется соединение голубого цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию редуцирующих сахаров, образовавшихся в процессе ферментативной реакции. Интенсивность окраски полученных растворов измеряют на фотоэлектроколориметре при длине световой волны 610 нм; активность выражается в или см3 испытуемого препарата.
4.2. Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы, материалы
4.2.1. Для определения активности используют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование, лабораторную посуду, реактивы, материалы:
- весы неавтоматического действия по ГОСТ Р 53228, с пределами абсолютной допускаемой погрешности +/- 0,5 мг;
- фотоэлектроколориметр (КФК-3) или спектрофотометр (СФ) любого типа, которые обеспечивают измерения при длине световой волны 610 нм с погрешностью измерения коэффициента пропускания не более 1% (не более 0,01 единицы оптической плотности);
- холодильник бытовой;
- pH-метр любого типа для измерения в диапазоне от 0 до 14 pH с пределом допускаемой погрешности в эксплуатации +/- 0,1 единицы pH;
- магнитную мешалку любой марки, которая обеспечивает скорость вращения до ;
- ультратермостат или водяной термостат с точностью регулирования температуры +/- 1 °C;
- лабораторную центрифугу любого типа, которая обеспечивает скорость вращения не менее ;
- водяную баню любого типа, которая обеспечивает поддержание температуры (100 +/- 1) °C;
- секундомер с емкостью шкалы счетчика 1 мин, ценой деления 1 с и погрешностью +/- 1,5 с;
- пипетки автоматические вместимостью от 0,1 до 1,0 см3, 1,0 см3 и от 0,2 до 5,0 см3 с наконечниками;
- встряхиватель V-3 типа Вортекс или аналогичный для перемешивания жидкости;
- термометры ртутные стеклянные лабораторные от 0 °C до 50 °C и от 0 °C до 100 °C с ценой деления 0,1 °C или 0,5 °C по ГОСТ 28498;
- ареометры общего назначения по ГОСТ 18481;
- стаканы и колбы стеклянные лабораторные В-1-150 ТС, В-1-800 ТС, Кн-1-100-14/23 ТС по ГОСТ 25336;
Для просмотра документа целиком скачайте его >>>
