Утвержден и введен в действие
Приказом Федерального агентства
по техническому регулированию
и метрологии
от 23 ноября 2015 г. N 1941-ст
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
НАНОТЕХНОЛОГИИ
НАНОМАТЕРИАЛЫ ДЛЯ ИСПЫТАНИЙ В ТЕСТ-СИСТЕМАХ in vitro.
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ЭНДОТОКСИНОВ
С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЛИЗАТА АМЕБОЦИТОВ Limulus
(ЛАЛ-ТЕСТ)
Nanotechnologies. Nanomaterials for testing
in assay systems in vitro.
Method for determination of endotoxin using
Limulus amebocyte lysate (LAL-test)
(ISO 29701:2010, IDT)
ГОСТ Р ИСО 29701-2015
Группа Т58
ОКС 07.030
11.100.10
Дата введения
1 июля 2016 года
Предисловие
1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным учреждением "Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук" (ФИЦ Биотехнологии РАН) на основе собственного аутентичного перевода на русский язык стандарта, указанного в пункте 4
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 441 "Нанотехнологии"
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 23 ноября 2015 г. N 1941-ст
4 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 29701:2010 "Нанотехнологии. Испытания эндотоксинов на образцах наноматериалов для систем in vitro. Испытание Limulus amebocyte lysate (LAL)" (ISO 29701:2010 "Nanotechnologies - Endotoxin test on nanomaterial samples for in vitro systems - Limulus amebocyte lysate (LAL) test").
Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ Р 1.5-2012 (пункт 3.5)
5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Правила применения настоящего стандарта установлены в ГОСТ Р 1.0-2012 (раздел 8). Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)
1. Область применения
Настоящий стандарт распространяется на наноматериалы для испытаний в тест-системах in vitro и устанавливает метод определения содержания (количественной концентрации) эндотоксинов с использованием лизата амебоцитов (ЛАЛ-тест). ЛАЛ-тест применим для водных суспензий или экстрактов наноматериалов, пригодных для инкубирования при температуре 37 °C.
2. Термины и определения
В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
2.1 коагулоген (coagulogen): Способный свертываться белок, в результате реакции которого с эндотоксинами при проведении ЛАЛ-теста происходит увеличение вязкости испытуемого раствора и образование плотного геля.
Примечание - Коагулоген получают из клеток крови японского мечехвоста (Tachypleus tridentatus). Коагулоген состоит из 175 аминокислот. Молекулярная масса коагулогена - 19723 [7].
2.2 коагулин (coagulin): Фрагмент коагулогена, образующийся в результате протеолиза коагулогена и свертывающегося фермента при проведении ЛАЛ-теста.
Примечание - Коагулин получают из клеток крови японского мечехвоста (Tachypleus tridentatus). Коагулин состоит из N-концевых фрагментов пептидов (Ala 1 - Arg 18) и C-концевых фрагментов пептидов (Gly 47 - Phe 175) [7].
2.3 эндотоксин (endotoxin): Компонент наружной части клеточной мембраны грамотрицательных бактерий.
Примечание - Основным активным компонентом эндотоксинов являются липополисахариды (ЛПС).
2.4 единица эндотоксина; ЕЭ (endotoxin unit; EU): Стандартная единица активности эндотоксинов.
Примечания
1 Комитетом экспертов по стандартизации биологических препаратов (КЭСБП) Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) в 1996 году установлено значение ЕА, соответствующее 0,1 нг или 10 ЕЭ/нг эндотоксинов кишечной палочки (Escherichia coli) Американского национального стандарта эндотоксина (АНСЭ) [8].
2 Одна ЕЭ соответствует одной международной единице (МЕ) эндотоксина.
2.5 чувствительность ЛАЛ-реактива (lambda, ): Значение концентрации эндотоксинов, заявленное изготовителем и используемое при вычислениях в гель-тромб тесте, при построении стандартной кривой в турбидиметрических и хромогенных методах, выраженное в ЕЭ/мл.
2.6 лизат амебоцитов Limulus; ЛАЛ-реактив (Limulus amebocyte lysate; LAL): Водная вытяжка из клеток крови (амебоцитов) мечехвоста Limulus polyphemus (ЛАЛ-реактив) или Tachypleus tridentatus (ТАЛ-реактив).
2.7 метод определения содержания эндотоксинов с использованием лизата амебоцитов Limulus; ЛАЛ-тест (Limulus amebocyte lysate test; LAL test): Способ определения количественной концентрации бактериальных эндотоксинов в испытуемом материале с применением ЛАЛ-реактива.
Примечание - ЛАЛ-тест имеет другое наименование "Испытание на бактериальные эндотоксины" (БЭТ).
2.8 оптическая плотность; ОП (optical density; OD): Величина, равная десятичному логарифму величины, обратной коэффициенту пропускания.
2.9 испытуемая проба (test sample): Водная суспензия или экстракт наноматериала, являющиеся объектом испытания.
3. Обозначения и сокращения
В настоящем стандарте применены следующие обозначения и сокращения:
АНСЭ (RSE) - Американский национальный стандарт эндотоксина;
БЭТ (BET) - испытание на бактериальные эндотоксины;
ВОЗ (WHO) - Всемирная организация здравоохранения;
ЕЭ (EU) - единица эндотоксина;
И/А (I/EC) - ингибирование или активация реакции ЛАЛ-реактива с эндотоксинами;
КСЭ (CSE) - контрольный стандарт эндотоксина;
КЭСБП (ECBS) - Комитет экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов;
ЛАЛ-реактив (LAL) - лизат амебоцитов Limulus;
ЛПС (LPS) - липополисахарид;
НСЭ (EF) - предметы или вещества, не содержащие эндотоксинов;
ОП (OD) - оптическая плотность.
4. Общие требования
4.1 Хранение наноматериалов
Наноматериалы, благодаря большой удельной площади поверхности, могут адсорбировать загрязняющие вещества, в том числе эндотоксины. До проведения испытаний наноматериалы следует хранить в герметичных контейнерах, не содержащих эндотоксинов (далее - НСЭ), например, в стерильных стеклянных контейнерах. Для проверки контейнеров на содержание эндотоксинов применяют порошки оксидов металлов или металлоидов, например двуокись титана, диоксид кремния НСЭ.
Примечания
1 Для хранения наноматериалов не допускается применять контейнеры из полипропилена. Полипропилен является мешающим фактором и оказывает влияние на результаты ЛАЛ-теста (см. приложение A).
2 Порошки оксидов металлов и металлоидов, не содержащие эндотоксины, получают путем термической обработки (см. 4.2).
4.2 Контейнеры для хранения наноматериалов
Хранение наноматериалов и испытуемых проб осуществляют в герметичных контейнерах НСЭ. Для удаления эндотоксинов контейнеры подвергают термической обработке при температуре не менее 250 °C в течение 30 мин. Допускается для хранения наноматериалов и испытуемых проб применять стерильные контейнеры из полистирола однократного применения.
4.3 Обращение с наноматериалами
Для испытаний применяют наноматериалы НСЭ. В процессе отбора, подготовки проб и проведения испытаний следует применять меры, предотвращающие загрязнение наноматериалов эндотоксинами, содержащимися в воздухе окружающей среды. Требования к условиям проведения отбора, подготовки проб и испытаний установлены в 6.5.
5. Испытуемая проба
5.1 Водная суспензия наноматериала
В качестве испытуемой пробы в ЛАЛ-тесте применяют водную суспензию, полученную путем диспергирования пробы наноматериала в воде для ЛАЛ-теста НСЭ.
5.2 Экстракт наноматериала
В качестве испытуемой пробы в ЛАЛ-тесте применяют экстракт наноматериала, полученный путем экстрагирования пробы наноматериала в экстрагирующем растворе (например, физиологическом растворе).
6. Приготовление испытуемой пробы
В программах и методиках испытаний должны быть установлены требования к приготовлению испытуемых проб. Сведения о применяемых методах отбора и подготовки пробы регистрируют в протоколе испытаний.
Для просмотра документа целиком скачайте его >>>
