Утвержден и введен в действие
Приказом Федерального агентства
по техническому регулированию
и метрологии
от 11 ноября 2015 г. N 1759-ст
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ ПО ВОЗДЕЙСТВИЮ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ
НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА
ИЗУЧЕНИЕ РЕПРОДУКТИВНОЙ ТОКСИЧНОСТИ НА ДВУХ ПОКОЛЕНИЯХ
ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ
Methods of testing the chemicals
of human hazard. Reproductive toxicity studies
on two generations of laboratory animals
(OECD Test N 416:2001
Two-Generation Reproduction Toxicity Study, IDT)
ГОСТ Р 56698-2015
ОКС 07.080
11.020
11.120.01
Дата введения
1 июля 2016 года
Предисловие
1 ПОДГОТОВЛЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 458 "Разработка, производство и контроль качества лекарственных средств" на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 4
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 458 "Разработка, производство и контроль качества лекарственных средств"
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 11 ноября 2015 г. N 1759-ст
4 Настоящий стандарт идентичен международному документу ОЭСР Тест N 416:2001 "Исследование репродуктивной токсичности на двух поколениях" (OECD Test N 416:2001 "Two-Generation Reproduction Toxicity Study").
Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного документа для увязки с наименованиями, принятыми в существующем комплексе стандартов "Методы испытания по воздействию химической продукции на организм человека"
5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Правила применения настоящего стандарта установлены в ГОСТ Р 1.0-2012 (раздел 8). Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)
Введение
В Копенгагене в июне 1995 г., Рабочая группа ОЭСР по репродуктивной и эмбриональной токсичности обсуждала необходимость актуализации существующих руководств ОЭСР по репродуктивной и эмбриональной токсичности и разработке новых руководств по конечным точкам исследования. Рабочая группа рекомендовала пересмотр руководства по исследованию репродуктивной токсичности на двух поколениях, с учетом предложений, полученных из США и Германии. Рабочая группа достигла согласия по основным элементам пересмотра данного руководства.
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает порядок проведения исследований репродуктивной токсичности на двух поколениях лабораторных животных с целью предоставления основной информации в отношении воздействия исследуемого вещества на состояние и функционирование мужской и женской репродуктивных систем, включая функцию гонад, овариальный цикл, сексуальное поведение, зачатие, беременность, роды, лактацию и вскармливание, рост и развитие потомства, а также получения предварительных данных о влиянии исследуемого вещества на неонатальную заболеваемость и смертность, об эффекте на пренатальное и постнатальное развитие.
Настоящий стандарт предназначен для изучения роста и развития поколения F1, а также для оценки сохранности и работоспособности мужской и женской репродуктивных систем, роста и развития поколения F2, при этом дальнейшая информация по эмбриональной токсичности и функциональным нарушениям может быть получена или с помощью дополнительных элементов, которые могут быть включены в рассматриваемый план исследования с учетом руководств по эмбриональной токсичности и/или эмбриональной нейротоксичности, или при отдельном изучении данных параметров с учетом соответствующих руководств.
2 Принципы исследования
Исследуемое вещество вводят в градуированных (пошагово увеличиваемых) дозах нескольким группам животных мужского и женского полов. Самцы поколения P должны получать вещества в процессе роста и в течение одного полного цикла сперматогенеза (приблизительно 56 дней у мышей и 70 дней у крыс), чтобы обнаружить какой-либо нежелательный эффект на сперматогенез. Влияние на сперму определяется по ряду параметров спермы (например, морфология спермы и подвижности сперматозоидов) и с помощью тщательной гистопатологии препаратов ткани. Если данные по сперматогенезу получены в ранее проведенном исследовании с многократным введением вещества в течение достаточного периода времени, например при 90-дневном исследования, то самцов поколения P можно не включать в план данного исследования. Однако рекомендуется организовать хранение образцов или цифровых изображений спермы поколения P для последующего возможного изучения. Самки поколения P должны получать исследуемое вещество в процесс роста и на протяжении нескольких полных овариальных циклов, чтобы обнаружить какой-либо нежелательный эффект исследуемого вещества на нормальное течение овариального цикла. Исследуемое вещество вводится первому (родительскому, P) поколению животных во время периода спаривания, в течение последующей беременности и на протяжении вскармливания их потомства, поколения F1. После вскармливания введение исследуемого вещества продолжается у животных поколения F1 в течение их роста до взросления, спаривания и получения поколения F2 и в период вскармливания поколения F2.
Наблюдение за животными и патологические исследования проводятся на всех животных с целью обнаружения токсических эффектов с основной целью - обнаружить влияние на состояние и функционирование мужской и женской репродуктивных систем, рост и развитие их потомков.
3 Описание метода/подготовительных работ к проведению исследования
3.1 Выбор вида лабораторных животных
Наиболее подходящими для данного вида исследования являются крысы. Если используют другие виды лабораторных животных, то следует обосновать сделанный выбор и внести соответствующие изменения в план исследования. Не следует использовать в исследовании линии животных с низкой плодовитостью или широко подтвержденной высокой вероятностью врожденных пороков развития. На начало исследования вариабельность массы тела лабораторных животных должна быть минимальной и не превышать 20% средней массы тела животных обоих полов.
3.2 Условия содержания и кормления
Температура в помещении для содержания лабораторных животных должна составлять (22 +/- 3) °C. Хотя относительная влажность должна быть не менее 30% и желательно не превышать 70%, за исключением периодов мойки помещения, оптимальным режимом является 50% - 60%. Освещение должно быть искусственным, с периодичностью света и темноты в 12 ч. Для кормления может быть использован стандартный лабораторный корм с неограниченной подачей питьевой воды. Выбор корма зависит от возможности его приемлемого смешивания с исследуемым веществом, если введение вещества осуществляется вместе с кормом.
Лабораторные животные могут содержаться в отдельных клетках небольшими группами одного пола. Процедуры спаривания следует проводить в клетках, позволяющих проведение данных процедур. После получения доказательства копуляции осемененные самки должны содержаться в индивидуальных клетках или клетках для беременных животных. Также животные могут содержаться небольшими группами и разделяться за 1 - 2 дня до родов. Лабораторные животные должны быть снабжены приемлемым и достаточным количеством материала для гнезда во время, предстоящее родам.
3.3 Подготовка лабораторных животных
В исследовании должны использоваться здоровые молодые особи, которые прошли период адаптации к лабораторным условиям в течение 5 дней и не подвергались ранее другим экспериментальным процедурам. Лабораторные животные должны быть описаны с указанием вида, линии, источника происхождения, пола, массы тела и/или возраста. Должны быть известны любые родственные отношения между включенными в исследование животными, чтобы исключить спаривание животных одного помета. Случайным образом животных распределяют в контрольную и испытуемую группы (рекомендуется метод стратификации по массе тела). Расположение клеток должно минимизировать какие-либо эффекты, связанные с их положением. Каждому животному должен быть присвоен уникальный идентификационный номер. Для животных поколения P присвоение номера должно быть проведено до начала введения исследуемого вещества. Идентификацию животных поколения F1 проводят при вскармливании особей, предназначенных для последующего спаривания. Записи о происхождении щенков должны вестись для всех выбранных животных поколения F1. Дополнительно рекомендуется организовать индивидуальную идентификацию всех щенков непосредственно после рождения, если план исследования предусматривает индивидуальное взвешивание или проведение функциональных тестов.
На начало исследования возраст животных поколения P должен составлять от 5 до 9 недель. По возможности животные во всех испытуемых группах должны быть одинакового возраста и массы тела.
4 Процедура
4.1 Количество и пол животных
Все испытуемые группы и контрольная группа должны состоять из количества животных, достаточного для получения предпочтительно не менее 20 беременных самок, достигших родов или практически достигших родов. При испытании веществ, которые вызывают токсический эффект (то есть стерилизацию, избыточный токсический эффект при высокой дозе) это может быть недостижимо. Основная задача - получить достаточное количество беременных животных для обеспечения информативной (достоверной) оценки возможного влияния вещества на фертильность, беременности, послеродовое поведение и вскармливание, рост и развитие поколения F1 от зачатия до полового созревания и развитие их потомства (поколения F2) до окончания грудного вскармливания. Таким образом, невозможность получить желаемого количества беременных самок (то есть 20) не обязательно требует прекращения исследования и должна оцениваться индивидуально для каждого случая.
4.2 Подготовка вещества для введения
4.2.1 Рекомендуется вводить исследуемое вещество внутрь (с кормом, питьевой водой или через желудочный зонд), если другой путь введения (например, накожный или ингаляционный) не будет сочтен более приемлемым.
4.2.2 При необходимости исследуемое вещество растворяют или суспензируют в пригодном растворителе. Рекомендуется, если это возможно, использовать водные растворы/суспензии (первый выбор), затем определяется возможность использования масляных растворов/суспензий (например, кукурузное масло) и затем возможность приготовления раствора с использованием других растворителей. Стабильность вещества в растворителе должна быть подтверждена.
4.3 Дозирование
4.3.1 В план исследования должны быть включены не менее 3 доз и соответствующая контрольная группа. При отсутствии ограничения по физико-химическим параметрам или биологическим эффектам исследуемого вещества выбранная наивысшая доза должна вызывать токсическое действие, но не быть летальной или вызывать тяжелые страдания. В случае неожиданной гибели животных допустимым считают исследования с уровнем смертности первого поколения P не более 10%. Последующие меньшие дозы определяются с целью продемонстрировать любые эффекты, связанные с дозой, и уровень "отсутствия токсических эффектов" (NOAEL) или дозы, близкие к пределу обнаружения, которые позволяют определить "нетоксичную" дозу. Обычно оптимальным считается 2 - 4-кратный интервал между используемыми более низкими дозами, и дополнительно для 4-й испытуемой группы рекомендуется использовать очень большой интервал (более, чем десятикратное уменьшение) между дозами. Для исследований, в которых вещество смешивают с кормом, интервал между дозами не должен превышать трехкратную дозу. Уровень доз следует выбирать с учетом имеющихся токсикологических данных, в частности, результатов исследований с многократным введением вещества. Любая имеющаяся информация о метаболизме и кинетике исследуемого вещества или родственных веществ должна быть учтена. Дополнительно такая информация будет также полезна для демонстрации адекватности выбранного режима дозирования.
Для просмотра документа целиком скачайте его >>>
