Введен в действие
Приказом Федерального агентства
по техническому регулированию
и метрологии
от 29 июня 2016 г. N 733-ст
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКЦИЯ ПИЩЕВАЯ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНА B6 (ВКЛЮЧАЯ ГЛИКОЗИЛИРОВАННЫЕ ФОРМЫ)
МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Foodstuffs. Determination of vitamin B6
(including its glycosylated forms) by high performance
liquid chromatography method
(EN 14663:2005, IDT)
ГОСТ EN 14663-2014
МКС 67.050
Дата введения
1 июня 2017 года
Предисловие
Цели, основные принципы и порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Научно-производственным республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации" (БелГИСС) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5
2 ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 июня 2014 г. N 45)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Армения AM Минэкономразвития Республики Армения
Беларусь BY Госстандарт Республики Беларусь
Казахстан KZ Госстандарт Республики Казахстан
Киргизия KG Кыргызстандарт
Молдова MD Молдова-Стандарт
Россия RU Росстандарт
Таджикистан TJ Таджикстандарт
Узбекистан UZ Узстандарт
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 июня 2016 г. N 733-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 14663-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июня 2017 г.
5 Настоящий стандарт идентичен европейскому стандарту EN 14663:2005 "Продукты пищевые. Определение витамина B6 (включая гликозилированные формы) с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии" [("Foodstuffs - Determination of vitamin B6 (including its glycosylated forms) by HPLC", IDT].
Европейский стандарт разработан Техническим комитетом по стандартизации CEN/TC 275 "Анализ пищевых продуктов. Горизонтальные методы" Европейского комитета по стандартизации (CEN).
При применении настоящего стандарта рекомендуется вместо ссылочного европейского стандарта использовать межгосударственный стандарт, сведения о котором приведены в дополнительном приложении ДА
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод определения витамина B6 в пищевой продукции с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
Витамин B6 определяется как сумма пиридоксина, пиридоксаля, пиридоксамина, включая их фосфорилированные производные, а также формы, в пересчете на пиридоксин.
Настоящий метод был успешно проверен на манной крупе с молоком (детское питание), картофельном пюре, овощах с ветчиной (типичная пищевая продукция) и мультивитаминном напитке в диапазоне концентраций от 0,034 мг/100 г до 1,210 мг/100 г.
2 Нормативные ссылки
Для применения настоящего стандарта необходим следующий ссылочный стандарт. Для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного стандарта (включая все его изменения).
EN ISO 3696 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)
3 Сущность метода
Производные витамина B6 (пиридоксаль, пиридоксамин и пиридоксин) извлекают из пищевой продукции путем кислотного гидролиза, затем подвергают ферментативному воздействию: дефосфорилируют, используя кислую фосфатазу, и дегликозилируют, используя .
Полученные производные витамина B6 разделяют и количественно определяют методом ВЭЖХ с флуоресцентным детектированием ([1], [2]).
4 Реактивы
4.1 Общие положения
В ходе анализа используют только реактивы признанной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты в соответствии с EN ISO 3696 или бидистиллированную воду.
4.2 Фосфат калия двузамещенный, массовая доля w (K2HPO4·3H2O) >= 99,9%.
4.3 Ацетат натрия безводный, w (CH3COONa) >= 99,0%.
4.4 Трихлоруксусная кислота (ТХУ), w (Cl3CCOOOH) >= 99,0%.
4.5 Раствор ацетата натрия молярной концентрацией c (CH3COONa) = 2,5 моль/дм3
205 г ацетата натрия (см. 4.3) растворяют в 1 дм3 воды.
4.6 Реагент послеколоночный (дополнительно), K2HPO4 раствор с концентрацией c (K2HPO4) = 0,15 моль/дм3.
Растворяют 34,2 г фосфата калия двузамещенного (см. 4.2) в воде, доводят до 1000 см3, перемешивают и дегазируют.
4.7 Соляная кислота, c(HCl) = 1 моль/дм3.
4.8 Соляная кислота, c(HCl) = 0,1 моль/дм3.
4.9 Соляная кислота, c(HCl) = 0,2 моль/дм3.
4.10 Серная кислота, c(H2SO4) = 1 моль/дм3.
4.11 Эфир петролейный, диапазон кипения от 40 °C до 60 °C.
4.12 Фосфатаза кислая из картофеля. Ферментативная активность составляет около 5,3 U/мг <1>.
--------------------------------
<1> U - данная единица измерения (международная или стандартная единица) определяется количеством фермента, который катализирует трансформацию 1 мкмоль субстрата в минуту при стандартных условиях.
Необходимо, чтобы используемый фермент с положительным результатом проходил проверку ферментативной активности согласно 4.13.2 (более подробная информация приведена в [2], [7]).
4.13 Раствор кислой фосфатазы
4.13.1 Общие положения
Растворяют 60 мг кислой фосфатазы (см. 4.12) в 10 см3 воды в конической колбе, перемешивая в течение 2 мин.
Раствор готовят в день проведения анализа.
4.13.2 Проверка ферментативной активности кислой фосфатазы
Взвешивают 10 г свинины, 5 г картофельного пюре или 5 г муки из цельного зерна в конической колбе и экстрагируют кислотой, как описано в 6.2.1. Добавляют к 12,5 см3 раствора экстрагированной пробы 1 см3 раствора кислой фосфатазы (см. 4.13.1) и опционально 1 см3 раствора (см. 4.15) и перемешивают. Инкубируют раствор в течение не менее 12 ч или в течение ночи при температуре 37 °C при постоянном перемешивании. Повторяют эту операцию с двойным количеством раствора кислой фосфатазы.
Определяют массовую концентрацию витаминов в соответствии с 6.6. Ферментативная активность используемого фермента считается достаточной, если значения массовой концентрации соединений витамина B6 в обоих растворах пробы эквивалентны. На хроматограмме должен отсутствовать пик фосфата пиридоксамина.
Примечание - Для межлабораторного испытания использовали кислую фосфатазу производства Sigma Nr P 3752 <2>.
--------------------------------
<2> Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не является рекламой указанного продукта со стороны CEN. Допускается использовать аналогичную продукцию, если она позволяет получать сопоставимые результаты.
4.14 из миндаля с ферментативной активностью приблизительно 3,2 U/мг
Необходимо, чтобы используемый фермент с положительным результатом проходил проверку ферментативной активности согласно 4.15.2 (более подробная информация приведена в [2], [7]).
4.15 Раствор
4.15.1 Общие положения
Растворяют 100 мг (см. 4.14) в 10 см3 воды в конической колбе, перемешивая в течение 2 мин.
Раствор готовят в день проведения анализа.
4.15.2 Проверка ферментативной активности
Взвешивают 10 г свинины, 5 г картофельного пюре или 5 г муки из цельного зерна в конической колбе и экстрагируют кислотой, как описано в 6.2.1. Добавляют к 12,5 см3 раствора экстрагированной пробы 1 см3 раствора кислой фосфатазы (см. 4.13.1) и 1 см3 раствора (см. 4.15.1) и перемешивают. Инкубируют раствор в течение не менее 12 ч или в течение ночи при температуре 37 °C при постоянном перемешивании. Данную операцию повторяют с двойным количеством раствора .
Для просмотра документа целиком скачайте его >>>
