Введен в действие
Приказом Федерального
агентства по техническому
регулированию и метрологии
от 13 мая 2016 г. N 312-ст
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКЦИЯ ПИЩЕВАЯ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНА K1 МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ
ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Foodstuffs.
Determination of vitamin K1 by high performance
liquid chromatographic method
(EN 14148:2003, IDT)
ГОСТ EN 14148-2015
МКС 67.050
Дата введения
1 июля 2017 года
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Научно-производственным республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации" (БелГИСС)
2 ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации по переписке (протокол от 27 февраля 2015 г. N 75-П)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Армения AM Минэкономики Республики Армения
Беларусь BY Госстандарт Республики Беларусь
Казахстан KZ Госстандарт Республики Казахстан
Киргизия KG Кыргызстандарт
Молдова MD Молдова-Стандарт
Россия RU Росстандарт
Таджикистан TJ Таджикстандарт
Узбекистан UZ Узстандарт
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 13 мая 2016 г. N 312-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 14148-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.
5 Настоящий стандарт идентичен европейскому стандарту EN 14148:2003 "Продукция пищевая. Определение витамина K1 с помощью ВЭЖХ" ("Foodstuffs. Determination of vitamin K1 by HPLC", IDT)
Европейский стандарт EN 14148:2003 разработан техническим комитетом CEN/TC 275 "Анализ пищевых продуктов. Горизонтальные методы" Европейского комитета по стандартизации (CEN).
Официальный экземпляр европейского стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и европейского стандарта, на который дана ссылка, имеются в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов.
При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им нормативные стандарты Российской Федерации, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод определения витамина K1 в пищевой продукции с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Определение витамина K1 проводится путем измерения восстановленного филлохинона. Метод прошел валидацию для молока и детских смесей, однако известен опыт лабораторий, который показал, что метод также применим к другой пищевой продукции [10].
2 Нормативные ссылки
Для применения настоящего стандарта необходим следующий ссылочный документ. Для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного стандарта (включая все его изменения).
EN ISO 3696 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)
3 Сущность метода
Витамин K1 отделяют в растворе пробы от сопутствующих веществ методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и определяют флуориметрическим методом после восстановления в послеколоночном реакторе. Количественно определяют сумму изомеров витамина K1, которые на колонках с фазой C18 выходят в виде единого неразрешенного пика [1] - [4].
4 Реактивы
4.1 Общие положения
Для проведения анализа, если не указано иное, используют только реактивы признанной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696 или дистиллированную воду.
4.2 Химические вещества и растворы
4.2.1 Метанол, массовая доля w (CH3OH) >= 99,8%.
4.2.2 Этанол, объемная доля .
4.2.3 Смесь этанола и метанола, объемная доля
Смешивают 950 см3 этанола (4.2.2) с 50 см3 метанола (4.2.1).
4.2.4 Дихлорметан, массовая доля w (CH2Cl2) >= 99,5%.
4.2.5 Н-гексан, массовая доля w (C6H14) >= 97%.
4.2.6 Петролейный эфир, с диапазоном температуры кипения 35 - 60 °C, ч.д.а.
4.2.7 Гидроксид калия, массовая доля w (KOH) >= 85%.
4.2.8 Раствор гидроксида калия молярной концентрации c (KOH) = 10 моль/дм3.
4.2.9 Калий фосфорнокислый однозамещенный, массовая доля w (KH2PO4) >= 99,5%.
4.2.10 Карбонат калия, массовая доля w (K2CO3) >= 99,9%.
4.2.11 Ацетат натрия, безводный, массовая доля w (CH3COONa) >= 99,5%.
4.2.12 Уксусная кислота, массовая доля w (CH3COOH) >= 99,8%.
4.2.13 Хлорид цинка, массовая доля w (ZnCl2) >= 98%.
4.2.14 Цинк, порошок, размер частиц < 63 мкм, массовая доля w (Zn) >= 97%.
4.2.15 Фосфатный буфер с pH 7,9 - 8,0
Растворяют 54,0 г калия фосфорнокислого однозамещенного (4.2.9) примерно в 350 см3 воды, регулируют pH до 7,9 - 8,0 раствором гидроксида калия (4.2.8) и разбавляют до 500 см3 водой.
4.2.16 Раствор хлорида-ацетата цинка
Взвешивают 13,7 г хлорида цинка (4.2.13), 4,1 г безводного натрия ацетата (4.2.11) и 3,0 г уксусной кислоты (4.2.12) и переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3, растворяют в метаноле (4.2.1) и объем содержимого колбы доводят до метки метанолом.
4.2.17 Липаза типа VII
Липаза из Candida rugosa с каталитической активностью 1000 Ед/мг или другой подходящий вариант <1>. Могут использоваться другие источники фермента из видов Pseudomonas и Rhizopus с учетом разницы в показателях активности.
--------------------------------
<1> Например, L-1754; Sigma Chemical Co, P.O. 14508, Saint Louis MO 63178, USA (США). Указанный продукт использовался в межлабораторном испытании. Информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не является рекламой указанного продукта со стороны CEN. Могут быть использованы эквивалентные продукты, если было установлено, что они дают аналогичные результаты.
4.2.18 Подвижная фаза для ВЭЖХ
Смешивают 100 см3 дихлорметана (4.2.4), 900 см3 метанола (4.2.1) и 5 см3 раствора хлорида-ацетата цинка (4.2.16). Фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 мкм.
4.3 Витамин K1, образец сравнения (филлохинон, 3-фитилменадион), массовая доля w (C31H46O2) >= 99%
Витамин K1 можно приобрести у различных поставщиков. Степень чистоты филлохинона может отличаться. Поэтому необходимо определить массовую концентрацию градуировочного раствора спектрофотометрическим методом в ультрафиолетовой области (см. 4.4.4).
4.4 Исходные растворы
4.4.1 Меры предосторожности
Витамин K1 очень чувствителен к свету. Следует принять меры по защите образца сравнения и соответствующих растворов в процессе выполнения методики с использованием лабораторной посуды из коричневого стекла.
4.4.2 Исходный раствор I витамина K1, массовой концентрацией
Взвешивают около 100 мг (точная навеска) образца сравнения витамина K1 (4.3), переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в метаноле (4.2.1) и объем содержимого колбы доводят до метки метанолом. Раствор можно хранить в среде азота в течение 3 мес при температуре минус 20 °C в темном
Для просмотра документа целиком скачайте его >>>
