Утвержден и введен в действие
Приказом Федерального
агентства по техническому
регулированию и метрологии
от 17 октября 2011 г. N 457-ст
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОХРАТОКСИНА A В КОРИНКЕ, ИЗЮМЕ,
КИШМИШЕ, СМЕСЯХ СУШЕНЫХ ФРУКТОВ И ИНЖИРЕ СУШЕНОМ.
МЕТОД ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
С ПРИМЕНЕНИЕМ ИММУНОАФФИННОЙ КОЛОНОЧНОЙ ОЧИСТКИ
ЭКСТРАКТА И ДЕТЕКТИРОВАНИЯ ПО ФЛЮОРЕСЦЕНЦИИ
Foodstuffs. Determination of ochratoxin A in currants,
raisins, sultanas, mixed dried fruit and dried figs. High
performance liquid chromatographic (HPLC) method with
immunoaffinity column cleanup and fluorescence detection
EN 15829:2010
Foodstuffs - Determination of ochratoxin A
in currants, raisins, sultanas, mixed dried fruit and dried
figs - HPLC method with immunoaffinity column cleanup
and fluorescence detection
(IDT)
ГОСТ Р ЕН 15829-2011
Группа Н09
ОКС 67.050
67.080.10
ОКСТУ 9109
9709
Дата введения
1 января 2013 года
Предисловие
1. Подготовлен Государственным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт консервной и овощесушильной промышленности" Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИКОП Россельхозакадемии) на основе собственного аутентичного перевода на русский язык европейского регионального стандарта, указанного в пункте 4.
2. Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность".
3. Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 17 октября 2011 г. N 457-ст.
4. Настоящий стандарт идентичен европейскому региональному стандарту ЕН 15829:2010 "Продукты пищевые. Определение охратоксина A в коринке, изюме, кишмише, смешанных сушеных фруктах и инжире сушеном. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта и детектирования по флюоресценции" (EN 15829:2010 "Foodstuffs - Determination of ochratoxin A in currants, raisins, sultanas, mixed dried fruit and dried figs - HPLC method with immunoaffinity column cleanup and fluorescence detection").
При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочного регионального стандарта соответствующий ему национальный стандарт Российской Федерации, сведения о котором приведены в дополнительном Приложении ДА.
5. Введен впервые.
Правила применения настоящего стандарта установлены в ГОСТ Р 1.0-2012 (раздел 8). Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (gost.ru).
1. Область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод определения охратоксина A в коринке, изюме, кишмише, смесях сушеных фруктов и сушеном инжире с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с применением очистки экстракта на колонке с иммуноаффинным сорбентом и детектированием по флюоресценции. Метод прошел валидацию путем межлабораторных испытаний проб, загрязненных охратоксином A естественным и искусственным образом в диапазоне содержания от 1,1 до 11 мг/кг.
Подробная информация о валидации метода приведена в разделе 9 и в Приложении B.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Применение настоящего стандарта предусматривает использование опасных веществ, материалов, процедур и оборудования. В задачи настоящего стандарта не входит решение проблем, связанных с обеспечением безопасности при его применении. Ответственность за принятие надлежащих мер предосторожности и соблюдение правил техники безопасности лежит на пользователе настоящего стандарта.
2. Нормативные ссылки
Приведенные ниже ссылочные нормативные документы являются обязательными для применения настоящего стандарта. Датированные ссылки предполагают возможность использования только указанного издания документа. В случае недатированных ссылок используют последнее издание документа.
ЕН ИСО 3696 Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний (ИСО 3696:1987) [EN ISO 3696, Water for analytical laboratory use - Specifications and test methods (ISO 3696:1987)].
3. Сущность метода
Анализируемую пробу экстрагируют смесью метанола и фосфорной кислоты. Экстракт фильтруют, разбавляют фосфатно-хлоридным буферным раствором и пропускают через колонку, заполненную иммуноаффинным сорбентом, содержащим антитела, специфичные к охратоксину A. При этом происходит сорбция, очистка и концентрирование охратоксина A, после чего охратоксин A элюируют с колонки. Количественное определение охратоксина A проводят с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением аналитической колонки с обращенно-фазовым сорбентом и детектирования по флюоресценции.
4. Реактивы
4.1. Общие положения
Для проведения анализа при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы гарантированной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты по ЕН ИСО 3696. Используемые растворители по степени чистоты должны быть пригодны для применения в анализе с помощью ВЭЖХ. Допускается использование готовых растворов при условии, что их характеристики не отличаются от приведенных ниже.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Утилизацию отработанных растворителей проводят в соответствии с требованиями законодательства по охране окружающей среды. Способы обезвреживания отработанных реактивов приведены в материалах Международного агентства по исследованию рака (IARC) [1].
4.2. Гелий газообразный очищенный сжатый.
4.3. Натрий фосфорнокислый двухзамещенный безводный или гидратированный (Na2HPO4·12H2O).
4.4. Калий хлористый.
4.5. Калий фосфорнокислый однозамещенный.
4.6. Натрий хлористый.
4.7. Натрия гидроксид.
4.8. Аммония гидроксид, раствор молярной концентрации c (NH4OH) = 1,1 моль/дм3 для послеколоночного смещения значения pH элюента (применяется по выбору пользователя, см. 7.2).
Раствор готовят в день использования.
4.9. Кислота соляная, раствор массовой долей w (HCl) = 37%.
4.10. Кислота фосфорная, раствор молярной концентрации c (H3PO4) = 0,1 моль/дм3.
4.11. Кислота соляная, раствор молярной концентрации c (HCl) = 0,1 моль/дм3
Раствор готовят разбавлением 8,28 см3 раствора соляной кислоты по 4.9 водой до 1 дм3.
4.12. Натрия гидроксид, раствор молярной концентрации c (NaOH) = 0,1 моль/дм3
Раствор готовят растворением 4 г гидроксида натрия по 4.7 в 1 дм3 воды.
4.13. Раствор фосфатно-хлоридный буферный
Растворяют 8,0 г хлорида натрия по 4.6, 1,2 г безводного двухзамещенного фосфата натрия (или 2,9 г гидратированного двухзамещенного фосфата натрия (Na2HPO4·12H2O) по 4.3, 0,2 г однозамещенного фосфата калия по 4.5 и 0,2 г хлорида калия по 4.4 в 900 см3 воды.
Значение pH приготовленного раствора доводят до 7,4 путем добавления раствора соляной кислоты по 4.11 либо раствора гидроксида натрия по 4.12, после чего объем раствора доводят водой до 1 дм3. В качестве альтернативы допускается использовать имеющийся в продаже готовый раствор с аналогичными характеристиками.
4.14. Ацетонитрил.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Ацетонитрил является токсичным веществом, поэтому все операции по приготовлению растворов, содержащих ацетонитрил, следует проводить в вытяжном шкафу с использованием взрывобезопасного перемешивающего устройства. Фильтрование растворов, содержащих ацетонитрил, проводят также в вытяжном шкафу.
4.15. Кислота уксусная ледяная массовой долей w (CH3COOH) >= 98%.
4.16. Метанол.
4.17. Толуол.
4.18. Растворитель для инжекций
Смешивают воду, ацетонитрил по 4.14 и уксусную кислоту по 4.15 в объемном соотношении 80:20:2.
4.19. Подвижная фаза для ВЭЖХ
Смешивают воду, ацетонитрил по 4.14 и ледяную уксусную кислоту по 4.15 в объемном соотношении 99:99:2. Полученную подвижную фазу дегазируют, например, с использованием гелия по 4.2.
4.20. Смешанный раствор толуола и уксусной кислоты
Смешивают толуол по 4.17 с ледяной уксусной кислотой по 4.15 в объемном соотношении 99:1.
4.21. Колонка с иммуноаффинным сорбентом
Колонка с иммуноаффинным сорбентом содержит антитела, специфичные в отношении охратоксина A. Для проведения испытания пригодна колонка сорбционной емкостью по отношению к охратоксину A не менее 100 нг, обеспечивающая открываемость не менее 70% при внесении в нее 5 нг охратоксина A в растворе, состоящем из ацетонитрила по 4.14 и фосфатно-хлоридного буферного раствора по 4.13 в объемном соотношении 5:95.
4.22. Силанизирующий раствор для обработки внутренней поверхности лабораторной посуды (применяется по выбору пользователя)
Смешивают силанизирующий реактив с толуолом по 4.17 в объемном соотношении 1:19.
4.23. Охратоксин A, ампульный препарат в кристаллической или пленочной форме.
4.24. Охратоксин A, основной стандартный раствор
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Охратоксин A является сильным нефротоксином с иммунотоксическими, тератогенными и, предположительно, генотоксическими свойствами. Международное агентство по исследованию рака характеризует охратоксин A как потенциальный канцероген для человека (группа 2B). Все работы,
Для просмотра документа целиком скачайте его >>>
