Введен в действие
Приказом Федерального агентства
по техническому регулированию
и метрологии
от 22 ноября 2013 г. N 773-ст
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ ПО ВОЗДЕЙСТВИЮ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ
НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА
IN VITRO 3T3 NRU ТЕСТ НА ФОТОТОКСИЧНОСТЬ
Testing of chemicals of health hazard
In vitro 3T3 NRU phototoxicity test
(OECD, Test N 432:2004, IDT)
ГОСТ 32372-2013
МКС 71.040.10
Дата введения
1 августа 2014 года
Предисловие
Цели, основные принципы и порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным бюджетным учреждением здравоохранения "Российский регистр потенциально опасных химических и биологических веществ" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУЗ "Российский регистр потенциально опасных химических и биологических веществ" Роспотребнадзора), Федеральным государственным унитарным предприятием "Всероссийский научно-исследовательский центр стандартизации, информации и сертификации сырья, материалов и веществ" (ФГУП "ВНИЦСМВ")
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 44-2013 от 14 ноября 2013 г.)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Армения AM Минэкономики Республики Армения
Казахстан KZ Госстандарт Республики Казахстан
Киргизия KG Кыргызстандарт
Молдова MD Молдова-Стандарт
Россия RU Росстандарт
Таджикистан TJ Таджикстандарт
4 Настоящий стандарт идентичен международному документу OECD Test N 432:2004 "In vitro 3T3 NRU phototoxicity test" (ОЭСР Тест N 432 "In vitro 3T3 NRU тест на фототоксичность").
Перевод с английского языка (en).
Степень соответствия - идентичная (IDT)
5 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноября 2013 г. N 773-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32372-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 августа 2014 г.
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменений к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и правок в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомления и тексты размещаются в информационной системе общего пользования - на информационном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет.
Введение
Установлено, что многие типы веществ могут индуцировать фототоксический эффект. Их общее свойство - это способность поглощать световую энергию в диапазоне солнечного излучения. В соответствии с первым законом фотохимии (закону Гротгуса - Дрейпера), фотореакции требуют достаточного поглощения световых квантов. Предполагается, что если молярная оптическая плотность/коэффициент поглощения менее, чем 10 л x моль-1 x см-1 вещество не является фотореакционным. Подобное вещество, возможно, не нужно исследовать на фототоксичность с использованием in vitro 3T3 NRU теста или любого другого биологического теста [1].
Исследование фототоксичности in vitro 3T3 NRU тестом позволяет прогнозировать острый фототоксический эффект в тестах in vivo на животных и человеке. Тест не позволяет прогнозировать другие неблагоприятные эффекты, которые могут возникнуть при комбинированном воздействии вещества и света, например: он не определяет фотогенотоксичность, фотоаллергическую реакцию, фотоканцерогенность и не позволяет оценивать фототоксический потенциал. Тест также не позволяет определять непрямые механизмы фототоксичности, эффекты метаболитов исследуемого вещества или эффекты смесей.
Так как до настоящего времени использование метаболизирующих систем является основным требованием всех тестов in vitro для прогноза генотоксичности и канцерогенного потенциала, применительно к фототоксикологии только в редких случаях требуются продукты метаболизма веществ для оценки фототоксического действия в опытах in vivo и in vitro. Таким образом, данный метод тестирования не является обязательным для метаболически активных систем.
1. Область применения
Настоящий стандарт устанавливает процедуру испытания химической продукции на фототоксичность методом In vitro 3T3 NRU.
Тест на фототоксичность используется для определения фототоксического потенциала исследуемого вещества, индуцированного тестируемым веществом после экспозиции светом. Тест оценивает фотоцитотоксичность по снижению жизнеспособности клеток, подвергавшихся воздействию химического вещества в присутствии или отсутствии света. Вещества, выявленные в данном тесте, являются фототоксичными in vivo после системного нанесения и распределения на коже или после местного нанесения.
2. Термины и определения
В настоящем стандарте применены следующие термины и обозначения с соответствующими определениями:
2.1 диапазон волн УФ излучения (UV light wavebands): Обозначения, рекомендуемые Международной комиссией по освещению (МКО) следующие: УФ A (от 315 до 400 нм), УФ B (от 280 до 315 нм) и УФ C (от 100 до 280 нм).
Примечание - Другие обозначения также используются; разделение между УФ B и УФ A часто помещается на 320 нм, и УФ A может разделяться на УФ-A1 и УФ-A2 с разделением на отметке 340 нм.
2.2 жизнеспособность клетки (Cell viability): Параметр, измеряющий общую активность популяций клеток (например, поглощение витального красителя нейтрального красного (Neutral red) клеточными лизосомами), которая в зависимости от конечной точки измерения и используемой схемы эксперимента коррелирует с общим числом и/или выживаемостью клеток.
2.3 нейтральный красный: Слабый катионный краситель, который легко проникает сквозь клеточные мембраны путем недиффузионного, межклеточного накопления в лизосомах.
2.4 облучение (Irradiance): Интенсивность падения на поверхность ультрафиолетового излучения или излучения видимого спектра, измеренная, в Вт/м2 или мВт/см2.
2.5 относительная жизнеспособность клетки (Relative cell viability): Жизнеспособность клетки, выраженная в отношении контроля за растворителем (отрицательного), который использовался в течение всей процедуры испытания (+Irr, -Irr), но не обрабатывался исследуемым веществом.
2.6 световая доза (Dose of light): Количество (интенсивность x время) ультрафиолетового (УФ) или видимого излучения, падающего на поверхность, и выраженная в Дж (Вт x с) на площадь поверхности, например: Дж/м2 и Дж/см2.
2.7 фототоксичность (Phototoxicity): Острая токсическая реакция, которая появляется после первого воздействия на кожу конкретных химических веществ и при последующей экспозиции светом, или которая вызывается также облучением кожи после системного воздействия химического вещества.
2.8 Balb/c 3T3 клетки: Фибробласты мышей альбиносов лабораторной линии Американской коллекции типовых культур (ATCC) или Европейской коллекции клеточных культур (ECACC).
2.9 IC50: Концентрация исследуемого вещества, при которой жизнеспособность клетки снижается до 50%.
2.10 MPE (средний фотоэффект): Значение измерения, полученное математическим анализом кривых реакций концентраций, полученных при отсутствии (-Irr) и в присутствии (+Irr) нецитотоксического облучения УФ A/видимым светом.
2.11 PIF (фактор облучения) (Photo-Irritation-Factor): Фактор, образованный путем сравнения двух одинаково эффективных цитотоксических концентраций (IC50) исследуемого вещества, полученный при отсутствии (-Irr) и в присутствии (+Irr) нецитотоксического облучения УФ A/видимого света.
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальный стандарты" за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяют в части, не затрагивающей эту ссылку.
3. Принцип метода испытания
In vitro 3T3 NRU тест по изучению фототоксичности основан на сравнении цитотоксичности химического вещества при его воздействии в условиях присутствия и отсутствия нецитотоксичной дозы имитируемого солнечного света. Цитотоксичность в данном тесте выражается, как зависимое от концентрации снижение поглощения витального красителя нейтрального красного и измеряемое через 24 часа после воздействия исследуемым химическим веществом и облучением. Изменение чувствительности поверхности лизосомной мембраны ведет к лизосомной хрупкости и другим изменениям, которые постепенно становятся необратимыми. Подобные изменения вызваны воздействием ксенобиотиков, в результате которого снижается поглощение и связывание нейтрального красного. Таким образом, становится возможным отличить жизнеспособные, поврежденные или мертвые клетки, что является основой данного метода исследования.
Balb/c 3T3 клетки выдерживают в питательной среде в течение 24 часов для формирования монослоев.
Два планшета с 96-ячейками для каждого исследуемого вещества выдерживают предварительно с восемью различными концентрациями вещества в течение часа.
Один из планшетов подвергают воздействию наивысшей нецитотоксичной дозой облучения, другой планшет оставляют в темноте. В обоих планшетах в тестируемую среду вносят культуру клеток и после следующих 24 часов инкубации по поглощению нейтрального красного определяют жизнеспособность клеток.
Жизнеспособность клеток выражается в процентах как по отношению к необработанному тестируемым веществом контролю и вычисляется для каждой тестовой концентрации.
Для определения фототоксического воздействия, полученные реакции на концентрации исследуемых веществ в присутствии и отсутствии облучения, сравниваются с IC50 уровнем, полученным в эксперименте с необработанным контролем.
Для просмотра документа целиком скачайте его >>>
