Введен в действие
Приказом Федерального агентства
по техническому регулированию
и метрологии
от 6 марта 2014 г. N 100-ст
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНА С ПОМОЩЬЮ
ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Foodstuffs. Determination of vitamin by HPLC
(EN 14152:2003, IDT)
ГОСТ EN 14152-2013
МКС 67.050
Дата введения
1 июля 2015 года
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены".
Сведения о стандарте
1. Подготовлен Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИКОП Россельхозакадемии).
2. Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт).
3. Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 5 ноября 2013 г. N 61-П).
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Армения AM Минэкономики Республики Армения
Беларусь BY Госстандарт Республики Беларусь
Казахстан KZ Госстандарт Республики Казахстан
Киргизия KG Кыргызстандарт
Молдова MD Молдова-Стандарт
Россия RU Росстандарт
Узбекистан UZ Узстандарт
4. Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 6 марта 2014 г. N 100-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 14152-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.
5. Настоящий стандарт идентичен европейскому региональному стандарту EN 14152:2003 Foodstuffs - Determination of vitamin by HPLC (Продукты пищевые. Определение витамина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии).
Европейский региональный стандарт разработан техническим комитетом CEN/TC 275 "Анализ пищевых продуктов. Горизонтальные методы", секретариатом которого считается DIN.
Перевод с немецкого языка (de).
Официальные экземпляры европейского регионального стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, имеются в Федеральном агентстве по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации.
Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным международным стандартам приведены в дополнительном Приложении ДА.
Степень соответствия - идентичная (IDT).
6. Взамен ГОСТ 25999-83 в части раздела 2.
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет.
1. Область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод определения витамина в пищевых продуктах с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Содержание витамина определяется как содержание рибофлавина.
2. Нормативные ссылки
Настоящий стандарт содержит отдельные положения из другого нормативного документа, обозначенного приведенной в данном разделе недатированной нормативной ссылкой, предполагающей использование последнего издания документа, включая все изменения.
EN ISO 3696 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний) (ISO 3696:1987)).
3. Сущность метода
Метод основан на экстракции рибофлавина из пробы путем кислотного гидролиза, последующем ферментативном дефосфорилировании рибофлавина и его количественном определении с помощью ВЭЖХ с флюориметрическим детектированием [1] - [8].
4. Реактивы
4.1. Общие положения
Для проведения анализа при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы гарантированной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696 или бидистиллированную воду.
4.2. Реактивы и растворы
4.2.1. Метанол чистотой не менее 99,8%.
4.2.2. Натрий уксуснокислый трехводный чистотой не менее 99%.
4.2.3. Натрий уксуснокислый, раствор молярной концентрации .
4.2.4. Натрий уксуснокислый, раствор молярной концентрации .
4.2.5. Кислота уксусная ледяная чистотой не менее 99,8%.
4.2.6. Кислота уксусная, раствор молярной концентрации .
4.2.7. Кислота соляная массовой долей 35%.
4.2.8. Кислота соляная, раствор молярной концентрации c(HCl) = 0,1 моль/дм3.
4.2.9. Кислота соляная, раствор молярной концентрации c(HCl) = 0,01 моль/дм3.
4.2.10. Кислота серная, раствор молярной концентрации .
4.2.11. Натрия гидроокись чистотой не менее 99%.
4.2.12. Натрия гидроокись, раствор молярной концентрации c(NaOH) = 0,5 моль/дм3.
4.2.13. Фосфора пентоксид чистотой не менее 98%.
4.2.14. Дефосфорилирующий фермент, пригодный для гидролиза связанного рибофлавина в пробе.
Примечание. При установлении характеристик прецизионности методики использована така-диастаза <*>.
--------------------------------
<*> Така-диастаза N T00040 - торговое наименование изделия, выпускаемого Platz and Bauer, Waterbury, CT 06708, США. Данная информация приведена для удобства применения настоящего стандарта и не является рекламной поддержкой МГС данного изделия. Допускается использовать аналогичные изделия при условии обеспечения идентичных результатов.
4.2.15. Подвижные фазы для ВЭЖХ
Варианты подвижных фаз подходящего состава приведены в пояснении к рисунку A.1 Приложения A и в Приложении C. В качестве подвижных фаз используют смеси метанола (см. 4.2.1) с водой, фосфатным или ацетатным буферным раствором при объемной доле метанола от 10% до 50%, а также подвижные фазы с добавлением ион-парных реагентов.
4.2.16. Раствор буферный фосфатный (pH = 3,5) молярной концентрации однозамещенного фосфата калия .
4.2.17. Тетраэтиламмония хлорид чистотой не менее 98%.
4.2.18. Натрия гептансульфонат чистотой не менее 98%.
4.3. Образцы сравнения
4.3.1. Рибофлавин чистотой не менее 98%
Рибофлавин выпускают многие производители, при этом его чистота может различаться. Это обусловливает необходимость определения концентрации градуировочного раствора рибофлавина спектрофотометрическим методом по 4.4.3.
4.3.2. Рибофлавин-5'-фосфат
Натриевая соль рибофлавин-5'-фосфата чистотой не менее 95%.
4.4. Основной раствор рибофлавина
4.4.1. Меры предосторожности
Рибофлавин весьма чувствителен к свету, поэтому образец сравнения рибофлавина и его растворы необходимо защищать от действия света путем всевозможных приемов, например, путем использования для их хранения сосудов из темного стекла.
4.4.2. Приготовление основного раствора рибофлавина массовой концентрации
Образец сравнения рибофлавина перед использованием высушивают и хранят в темноте в эксикаторе с помещенным в него пентоксидом фосфора (см. 4.2.13) или под вакуумом. Около 50 мг образца сравнения, измеренного с точностью до 1 мг, помещают в мерную колбу темного стекла вместимостью 500 см3 и растворяют в растворе уксусной кислоты (см. 4.2.6).
Срок хранения полученного раствора в темноте при температуре 4 °C - 2 мес.
Рибофлавин трудно растворим, поэтому для облегчения его растворения в мерную колбу с образцом сравнения вносят сначала 300 см3 раствора уксусной кислоты (см. 4.2.6). Колбу выдерживают на паровой бане при постоянном перемешивании до полного растворения рибофлавина. После охлаждения объем содержимого колбы доводят до метки раствором уксусной кислоты (см. 4.2.6). В качестве альтернативы в колбу с образцом сравнения вносят 5 см3 раствора гидроокиси натрия (см. 4.2.12). Поскольку рибофлавин нестабилен в щелочной среде, немедленно после его растворения в колбу вносят 1,5 см3 уксусной кислоты (см. 4.2.5), после чего объем содержимого колбы доводят до метки раствором уксусной кислоты (см. 4.2.6). Точную концентрацию основного раствора рибофлавина определяют по 4.4.3.
4.4.3. Определение точной концентрации основного раствора рибофлавина
В мерную колбу вместимостью 200 см3 помещают 20 см3 основного раствора рибофлавина (см. 4.4.2) и 3,5 см3 раствора ацетата натрия (см. 4.2.3), объем
Для просмотра документа целиком скачайте его >>>
