Введен в действие
Приказом Федерального агентства
по техническому регулированию
и метрологии
от 21 июля 2015 г. N 950-ст
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ НИАЦИНА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ
ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Foodstuffs. Determination of niacin
by high performance liquid chromatography
(EN 15652:2009, IDT)
ГОСТ EN 15652-2015
МКС 67.050
Дата введения
1 января 2017 года
Предисловие
Цели, основные принципы и порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" на основе аутентичного перевода на русский язык европейского регионального стандарта, указанного в пункте 5
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 29 мая 2015 г. N 77-П)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Армения AM Минэкономики Республики Армения
Беларусь BY Госстандарт Республики Беларусь
Казахстан KZ Госстандарт Республики Казахстан
Киргизия KG Кыргызстандарт
Молдова MD Молдова-Стандарт
Россия RU Росстандарт
Таджикистан TJ Таджикстандарт
Украина UA Минэкономразвития Украины
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 21 июля 2015 г. N 950-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 15652-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 г.
5 Настоящий стандарт идентичен европейскому региональному стандарту EN 15652:2009 Foodstuffs - Determination of niacin by HPLC (Продукты пищевые. Определение ниацина высокоэффективной жидкостной хроматографией).
Европейский региональный стандарт разработан техническим комитетом CEN/TC 275 "Анализ пищевых продуктов. Горизонтальные методы", секретариатом которого является DIN (Германия).
Перевод с немецкого языка (de).
Официальные экземпляры европейского регионального стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и европейского регионального стандарта, на который дана ссылка, имеются в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов.
Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным европейским региональным стандартам приведены в дополнительном приложении ДА.
Степень соответствия - идентичная (IDT)
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод определения содержания ниацина в пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) после гидролиза пробы, который может быть проведен тремя способами: кислотный гидролиз (A), ферментативный гидролиз (B) и последовательный кислотный и щелочной гидролиз (C).
Метод был валидирован при межлабораторных сравнительных испытаниях на обогащенных и не обогащенных пищевых продуктах, а именно пробах концентратов типа сухого завтрака - мюсли и мюсли с шоколадом, вареном окороке, зеленом горошке, лиофилизированном зеленом горошке с ветчиной, лиофилизированном супе, обогащенном апельсиновом соке, сухом молоке и пшеничной муке в диапазоне значений содержания ниацина от 0,5 до 24 мг/100 г. Дальнейшая информация приведена в Приложении B.
Способы A и B приводят к аналогичным результатам для ниацина. В этих случаях ниацин определяется как суммарное содержание никотинамида и никотиновой кислоты в пересчете на никотиновую кислоту [1]. Способ C приводит к более высоким значениям содержания ниацина в необогащенных злаках по сравнению со способами A и B, но в остальных пищевых продуктах дает сходные результаты. В способе C никотинамид превращается в никотиновую кислоту, и ниацин определяется в форме никотиновой кислоты [2].
Способ A является более производительным и экономичным, нежели способы B и C.
Способ B применяется, если требуется раздельное количественное определение никотинамида и никотиновой кислоты. Способ A для этих целей непригоден, поскольку при кислотном гидролизе никотинамид в небольшой степени превращается в никотиновую кислоту.
В способе C определяют общее содержание ниацина. Щелочной гидролиз может вызвать высвобождение никотиновой кислоты из других производных, как правило, не являющихся биологически активными, что приводит к завышенным значениям содержания ниацина в таких пищевых продуктах, как кукуруза или злаки ([3], [4], [5]).
Сравнение трех способов проведения гидролиза приведено в Приложении C.
2 Нормативные ссылки
Приведенные ниже ссылочные нормативные документы являются обязательными для применения настоящего стандарта. Для датированных ссылок применимо только цитируемое издание. В случае недатированных ссылок используют последнее издание документа, включая все изменения.
EN ISO 3696 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987 Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)
3 Сущность метода
Витамеры ниацина извлекают из пищевых продуктов путем кислотного гидролиза (способ A), ферментативного гидролиза (способ B) или последовательного кислотного и щелочного гидролиза (способ C) и определяют методом ВЭЖХ с флуориметрическим детектированием в режиме послеколоночной дериватизации под действием ультрафиолетового излучения ([1], [2]). В способах A и B ниацин определяется как сумма содержаний никотинамида и никотиновой кислоты в пересчете на никотиновую кислоту после введение поправки на молекулярную массу. При щелочном гидролизе никотинамид полностью переходит в никотиновую кислоту.
4 Реактивы
4.1 Общие положения
При проведении анализа, если не оговорены другие условия, используют только реактивы установленной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696.
4.2 Требования к химическим реактивам и приготовление растворов
4.2.1 Ацетат натрия, массовая доля основного вещества w(C2H3NaO2) не менее 99%.
4.2.2 Гидрофосфат калия, массовая доля основного вещества w(K2HPO4) не менее 99,5%.
4.2.3 Дигидрофосфат калия, массовая доля основного вещества w(KH2PO4) не менее 99,5%.
4.2.4 Раствор пероксида водорода, нестабилизированный, массовая доля пероксида водорода w(H2O2) = 30%.
4.2.5 Сульфат меди, массовая доля основного вещества w(CuSO4·5H2O) не менее 99%.
4.2.6 Уксусная кислота, массовая доля основного вещества w(CH3COOH) не менее 99,8%.
4.2.7 Концентрированная соляная кислота (для способов A и C), w(HCl) = 37,0%.
4.2.8 НАД+-гликогидролаза из Neurospora crassa (для способа B), активность 0,55 МЕ/мг белка.
Хранят при температуре ниже 0 °C.
Примечание - При межлабораторных сравнительных испытаниях была использована лиофилизированная НАД+-гликогидролаза (NADase), выделенная из Neurospora crassa, производства компании "Сигма", номер по каталогу N 9629, активностью от 0,5 до 3,0 МЕ/мг белка (биурет) <1>.
--------------------------------
<1> Эта информация приведена только для удобства пользователя настоящего стандарта и не означает поддержки данного продукта со стороны CEN. Допускается использование аналогичных продуктов, если доказано, что их использование приводит к аналогичному результату.
4.2.9 Раствор уксусной кислоты, молярная концентрация c(CH3COOH) = 5 моль/дм3.
4.2.10 Раствор ацетата натрия, молярная концентрация c(C2H3NaO2) = 2,5 моль/дм3.
4.2.11 Раствор сульфата меди, молярная концентрация c(Cu(II)SO4·5H2O) = 0,005 моль/дм3.
4.2.12 Приготовление раствора ацетата натрия молярной концентрации c(C2H3NaO2) = 0,05 моль/дм3 с pH 4,5
4,10 г ацетата натрия (4.2.1) растворяют в 900 см3 воды. Доводят значение pH раствора до 4,5 при помощи уксусной кислоты (4.2.6) и затем разбавляют водой до 1000 см3.
4.2.13 Приготовление фосфатного буферного раствора (для способа B) с pH 6,8
Одну объемную часть раствора гидрофосфата калия молярной концентрации 0,05 моль/дм3 смешивают с 1 объемной частью раствора дигидрофосфата калия молярной концентрации 0,05 моль/дм3. При необходимости доводят значение pH раствора до значения 6,8 при помощи раствора ацетата натрия (4.2.10).
4.2.14 Приготовление раствора НАД+-гликогидролазы (для способа B)
2,9 мг НАД+-гликогидролазы (4.2.8) растворяют в 5 см3 фосфатного буферного раствора (4.2.13). Срок хранения раствора - 7 дней при минус 18 °C.
4.2.15 Раствор соляной кислоты (для способов A и C) молярной концентрации c(HCl) = 0,1 моль/дм3.
4.2.16 Подвижная фаза для ВЭЖХ
4,77 г дигидрофосфата калия (4.2.3) растворяют в 400 см3 воды, добавляют 3,8 см3 раствора пероксида водорода (4.2.4) и 0,5 см3 раствора сульфата меди (4.2.11) и разбавляют водой до 500 см3. Значение pH раствора составляет приблизительно 4,5. Раствор фильтруют через мембранный фильтр (5.7). Срок хранения - 1
Для просмотра документа целиком скачайте его >>>
