Введен в действие
Приказом Федерального агентства
по техническому регулированию
и метрологии
от 13 ноября 2015 г. N 1811-ст
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ЧАЙ
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ КАТЕХИНОВ
Tea. Determination of catechins
(ISO 14502-2:2005,
Determination of substances characteristic of green
and black tea - Part 2: Content of catechins in green tea -
Method using high-performance liquid chromatography,
IDT)
ГОСТ ISO 14502-2-2015
МКС 67.140.10
Дата введения
1 января 2017 года
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Некоммерческой организацией "Российская Ассоциация производителей чая и кофе "РОСЧАЙКОФЕ" (Ассоциация "РОСЧАЙКОФЕ") на основе официального перевода на русский язык англоязычной версии указанного в пункте 5 стандарта, который выполнен ФГУП "СТАНДАРТИНФОРМ"
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 октября 2015 г. N 81-П)
За принятие голосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Армения AM Минэкономики Республики Армения
Киргизия KG Кыргызстандарт
Россия RU Росстандарт
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 13 ноября 2015 г. N 1811-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 14502-2-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 г.
5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 14502-2:2005 "Определение характеристик субстанций зеленого и черного чая. Часть 2. Общее содержание катехинов в зеленом чае. Метод с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии" ("Determination of substances characteristic of green and black tea - Part 2: Content of catechins in green tea - Method using high-performance liquid chromatography", IDT).
Международный стандарт разработан подкомитетом ISO TC 34/SC 8 "Чай" Технического комитета по стандартизации ISO/TC 34 "Пищевые продукты" Международной организации по стандартизации (ISO).
Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с общепринятой терминологией и ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6).
При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
1. Область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) для определения (измерения) общего содержания катехинов в чае, исходя из суммы индивидуальных катехинов. Настоящий стандарт распространяется на листовой и растворимый зеленый чай и на черный чай (см. приложение A).
Метод может быть также применен для определения галловой кислоты и кофеина, а также теогаллина и теафлавинов.
2. Нормативные ссылки
Следующие ссылочные нормативные документы являются обязательными при применении настоящего документа. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного документа, для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного документа (включая все его изменения).
ISO 1572 Tea - Preparation of ground sample of known dry matter content (Чай. Приготовление измельченной пробы с известным содержанием сухих веществ)
ISO 3696:1987 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)
ISO 7513 Instant tea in solid form - Determination of moisture content (loss in mass at 103 °C) [Чай быстрорастворимый в твердой форме. Определение содержания влаги (потеря массы при 103 град. C)]
3. Сущность метода
Катехины экстрагируют из измельченной пробы листового чая 70%-ным раствором метанола при температуре 70 °C. Пробу растворимого чая растворяют в горячей воде с добавлением раствора ацетонитрила объемной долей 10% для стабилизации экстракта. Индивидуальные катехины в экстракте определяют методом ВЭЖХ на колонке с фенильным сорбентом, используя градиентное элюирование с ультрафиолетовым детектированием при длине волны 278 нм. Для количественного определения используют метод внешнего стандарта. Стандартные образцы катехинов установленной чистоты и с известным содержанием влаги можно использовать без дополнительной подготовки. Как альтернатива, в качестве внешнего стандарта может применяться кофеин с учетом значений коэффициентов относительной чувствительности (RRF) индивидуальных катехинов, установленных международным межлабораторным испытанием ISO.
4. Реактивы
Используют реактивы только известной степени чистоты.
4.1 Вода, 1-й степени чистоты по ISO 3696.
4.2 Ацетонитрил класса для ВЭЖХ.
4.3 Метанол.
4.4 Кислота уксусная ледяная, класса для ВЭЖХ.
4.5 Метанол, водный раствор для экстракции объемной долей 70%
Вносят 700 см3 метанола (см. 4.3) в мерную колбу вместимостью 1 дм3 с одной меткой, доливают водой до метки (см. 4.1) и перемешивают.
4.6 Раствор ЭДТА, массовой концентрации 10 мг/см3
(1,00 +/- 0,01) г ЭДТА (двунатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты, дигидрат) помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3 с одной меткой, доливают примерно до половины колбы теплой водой. Перемешивают до полного растворения ЭДТА, охлаждают раствор до комнатной температуры, добавляют воду до метки и перемешивают.
Приготовленный раствор используют в течение одного дня.
4.7 Раствор аскорбиновой кислоты, массовой концентрации 10 мг/см3
(1,00 +/- 0,01) г L-аскорбиновой кислоты помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3 с одной меткой, доливают примерно до половины колбы водой. Перемешивают до полного растворения аскорбиновой кислоты, добавляют воду до метки и перемешивают.
Приготовленный раствор используют в течение одного дня.
4.8 Стабилизирующий раствор, состоящий из ацетонитрила объемной долей 10%, раствора ЭДТА массовой концентрации 500 мкг/см3 и аскорбиновой кислоты массовой концентрации 500 мкг/см3
Используя пипетку, переносят 25 см3 раствора ЭДТА (см. 4.6), 25 см3 раствора аскорбиновой кислоты (см. 4.7) и 50 см3 ацетонитрила (см. 4.2) в мерную колбу вместимостью 500 см3 с одной меткой, доливают воду до метки и перемешивают.
Приготовленный раствор используют в течение одного дня.
4.9 Подвижные фазы
Меры предосторожности - Следует использовать средства защиты глаз, перчатки и готовить реактивы в вытяжном шкафу.
4.9.1 Подвижная фаза A, состоящая из ацетонитрила объемной долей 9%, уксусной кислоты объемной долей 2%, раствора ЭДТА массовой концентрации 20 мкг/см3
180 см3 ацетонитрила (см. 4.2) и 40 см3 уксусной кислоты (см. 4.4) переносят в мерную колбу вместимостью 2 дм3 с одной меткой, доливают до половины колбы воду и добавляют 4,0 см3 раствора ЭДТА (см. 4.6). Доводят водой до метки, перемешивают и фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 мкм (см. 5.10).
4.9.2 Подвижная фаза B, состоящая из ацетонитрила объемной долей 80%, уксусной кислоты объемной долей 2%, раствора ЭДТА массовой концентрации 20 мкг/см3
800 см3 ацетонитрила (см. 4.2) и 20 см3 уксусной кислоты (см. 4.4) переносят в мерную колбу вместимостью 1 дм3 с одной меткой, доливают примерно 100 см3 воды, добавляют 2,0 см3 раствора ЭДТА (см. 4.6). Добавляют воду до метки, перемешивают и фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 мкм (см. 5.10).
4.10 Исходные стандартные растворы
4.10.1 Общие положения
Если имеются в наличии катехины известной чистоты, их можно использовать непосредственно в качестве внешних стандартов. Помимо установленной чистоты класса "для ВЭЖХ", важно, чтобы содержание влаги было также известно, поскольку высокие уровни содержания кристаллизационной воды не будут учтены при хроматографическом измерении. Данные о чистоте и содержании влаги в стандартных образцах, используемых в межлабораторном испытании, приведены в приложении B. Если отсутствуют полные данные о чистоте или они не могут быть определены, то содержащие катехин реагенты следует использовать только в качестве маркерных смесей в целях идентификации. В этих случаях количественный состав может быть установлен с использованием внешних стандартов кофеина в сочетании со значениями RRF индивидуальных катехинов (относительно кофеина), полученными в межлабораторных испытаниях (см. 9.3 и [3]).
4.10.2 Кофеин, исходный стандартный раствор массовой концентрации 2,00 мг/см3
(0,200 +/- 0,001) г безводного кофеина помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3 с одной меткой. Добавляют теплую воду до половины объема колбы. Перемешивают до полного растворения кофеина, охлаждают до комнатной температуры. Доводят до метки водой и перемешивают.
4.10.3 Галловая кислота, исходный стандартный раствор массовой концентрации приблизительно 1,00 мг/см3
(0,110 +/- 0,001) г моногидрата галловой кислоты (M = 188,14) помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3 с одной меткой, доливают примерно до половины колбы водой. Перемешивают до полного растворения галловой кислоты, добавляют воду до метки и перемешивают.
Приготовленный раствор используют в течение одного дня.
Для просмотра документа целиком скачайте его >>>
