Введен в действие
Приказом Федерального
агентства по техническому
регулированию и метрологии
от 11 мая 2016 г. N 295-ст
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНА B6 С ПОМОЩЬЮ
ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Foodstuffs. Determination of vitamin B6
by high performance chromatography
(EN 14164:2008, IDT)
ГОСТ EN 14164-2014
МКС 67.050
Дата введения
1 июля 2017 года
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Республиканским государственным предприятием "Казахстанский институт стандартизации и сертификации" Комитета технического регулирования и метрологии и Техническим комитетом по стандартизации ТК N 71 "Экологическая безопасность сырья, материалов, веществ и сооружений" <*>
--------------------------------
<*> На основе собственного перевода немецкоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5.
2 ВНЕСЕН Комитетом технического регулирования и метрологии Министерства индустрии и новых технологий Республики Казахстан
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 29 августа 2014 г. N 69-П)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Армения AM Минэкономики Республики Армения
Беларусь BY Госстандарт Республики Беларусь
Казахстан KZ Госстандарт Республики Казахстан
Киргизия KG Кыргызстандарт
Молдова MD Молдова-Стандарт
Россия RU Росстандарт
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 11 мая 2016 г. N 295-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 14164-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.
5 Настоящий стандарт идентичен европейскому стандарту EN 14164:2008 "Продукты пищевые. Определение витамина B6 с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии" ("Foodstuffs - Determination of vitamin B6 by HPLC", IDT).
Европейский стандарт EN 14164:2008 подготовлен Техническим комитетом CEN/TC 275 "Анализ пищевых продуктов. Горизонтальные методы" Европейского комитета по стандартизации (CEN).
Официальный экземпляр европейского стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и европейского стандарта, на который дана ссылка, имеются в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов.
Сведения о соответствии ссылочных европейских региональных стандартов межгосударственным стандартам приведены в дополнительном приложении ДА.
Степень соответствия - идентичная (IDT)
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод определения витамина B6 в пищевых продуктах с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ). Витамин B6 представляет собой сумму массовых долей пиридоксина, пиридоксаля, пиридоксамина, включая их фосфорилированные продукты замещения, в пересчете на пиридоксин. Они определяются по методу, указанному в [1], при помощи которого могут быть разделены и количественно определены как индивидуальные соединения - различные витамеры витамина B6 (пиридоксаль, пиридоксамин, пиридоксин). В [2] определяется общее содержание витамина B6 микробиологическим методом.
2 Нормативные ссылки
Для применения настоящего стандарта необходим следующий ссылочный нормативный документ. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного документа, для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного документа (включая все его изменения):
EN ISO 3696:1997 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)
3 Сущность метода
Пиридоксаль, пиридоксамин, пиридоксин извлекают из продуктов питания в ходе гидролиза в кислой среде и дефосфорилируют ферментативным путем, используя кислую фосфатазу. В результате реакции с глиоксиловой кислотой в присутствии Fe2+ в качестве катализатора пиридоксамин превращается в пиридоксаль, который далее переходит в пиридоксин под воздействием борогидрида натрия в щелочной среде.
Затем пиридоксин количественно определяют в растворе пробы с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуориметрическим детектором [3], [4].
4 Реактивы
4.1 Общие положения
Для испытаний используют реактивы гарантированной чистоты и воду не ниже 1-й степени чистоты в соответствии с EN ISO 3696.
4.2 Реактивы
4.2.1 Кислая фосфатаза из картофеля, ферментная активность составляет 33 нанокатал/мг <1> с субстратом нитрофенилфосфатом (при pH = 4,8 и температуре 37 °C), например, производства Boehringer или Sigma. Активность 33 нанокатал/мг соответствует 2 U/мг.
--------------------------------
<1> Катал (обозначается "кат") - единица измерения активности катализатора в системе СИ. Активность катализатора в один катал увеличивает скорость реакции на один моль/с в заданных условиях.
4.2.1.1 Раствор кислой фосфатазы
Готовят раствор кислой фосфатазы в растворе ацетата натрия (см. 4.2.14) массовой концентрации 20 мг/см3.
Необходимо использовать кислую фосфатазу, а не Така-диастазу для достижения полного гидролиза фосфорилированных форм витамина B6. Там, где требуется 300 мг Така-диастазы для получения хорошего дефосфорилирования, кислой фосфатазы потребуется всего 0,5 мг (см. [5]).
4.2.1.2 Проверка активности кислой фосфатазы
Проверяют активность каждой новой партии кислой фосфатазы следующим образом. Готовят исходный раствор пиридоксальфосфата массовой концентрации 0,1 мг/см3 (см. 4.2.9) в воде. Отбирают для экстракции 5,0 см3 этого раствора и проводят операции, предусмотренные в 6.2.1, 6.2.2, 6.2.3, 6.2.4 и 7.
Рассчитывают коэффициент извлечения пиридоксина из этого раствора и делят на теоретическое количество пиридоксина, выделенного из пиридоксальфосфата. Вычисляют теоретическую массовую концентрацию пиридоксина , мг/см3, выделенного из пиридоксальфосфата по формуле:
(1)
где - массовая концентрация пиридоксальфосфата, определенная спектрофотометрическим методом в УФ-области;
MPN - молярная масса образца сравнения витамина B6 - пиридоксина (MPN = 169,1), г/моль;
2 - коэффициент разбавления при реакции с борогидридом натрия;
5,0 - объем раствора, взятого для экстракции (см. 4.2.1.2), см3;
100 - общий объем исследуемого раствора пробы, см3;
MPLP - молярная масса пиридоксальфосфата (MPLP = 265,16), г/моль.
Смешивают 3,0 см3 исходного раствора пиридоксальфосфата и 10 см3 соляной кислоты (см. 2.21) в мерной колбе вместимостью 20 см3 и разбавляют до метки водой. Проверяют концентрацию пиридоксальфосфата путем измерения поглощения при 295 нм в кювете с толщиной слоя 1 см, используя спектрофотометр для УФ-области спектра (см. 5.2) относительно раствора соляной кислоты (см. 4.2.20). Молярный коэффициент поглощения пиридоксальфосфата в растворе соляной кислоты молярной концентрации 0,1 моль/дм3 равен 8353.
Рассчитывают массовую концентрацию исходного раствора пиридоксальфосфата , мг/см3, по формуле:
(2)
где A295 - оптическая плотность раствора при 295 нм;
MPLP - молярная масса пиридоксальфосфата (MPLP = 265,16), г/моль;
F - коэффициент разбавления (в данном случае F = 20/3);
- молярный коэффициент поглощения пиридоксальфосфата в 0,1 моль/дм3 соляной кислоты при 295 нм, дм3моль-1см-1 .
4.2.2 Ацетат натрия трехводный (тригидрат), с массовой долей .
4.2.3 Ледяная уксусная кислота, с массовой долей .
4.2.4 Глиоксиловая кислота, с массовой долей .
4.2.5 Сульфат железа (II) 7-водный (гептагидрат), с массовой долей .
Для просмотра документа целиком скачайте его >>>
