Введен в действие
Приказом Федерального агентства
по техническому регулированию
и метрологии
от 15 сентября 2016 г. N 1136-ст
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ НАПИТКИ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ
МЕТОД С ПРИМЕНЕНИЕМ ФОТОАКТИВНОЙ ФЕРМЕНТНОЙ СИСТЕМЫ (EPAS)
Milk and milk-based drinks. Determination
of alkaline phosphatase activity. Enzymatic
photo-activated system (EPAS) method
(ISO 22160:2007, IDT)
ГОСТ ISO 22160-2015
МКС 07.100.30;
67.100.01
Дата введения
1 июля 2017 года
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Научно-производственным республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации" (БелГИСС)
2 ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации по переписке (протокол от 27 февраля 2015 г. N 75-П)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ISO 3166) 004-97 Код страны по МК (ISO 3166) 004-97 Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Армения AM Минэкономики Республики Армения
Киргизия KG Кыргызстандарт
Молдова MD Молдова-Стандарт
Россия RU Росстандарт
Таджикистан TJ Таджикстандарт
Украина UA Минэкономразвития Украины
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 15 сентября 2016 г. N 1136-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 22160-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.
5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 22160:2007 "Молоко и молочные напитки. Определение действия щелочной фосфатазы. Метод с применением энзиматических фотоактивированных систем" ("Milk and milk-based drinks - Determination of alkaline phosphatase activity - Enzymatic photo-activated system (EPAS) method", IDT)
Международный стандарт разработан подкомитетом SC 5 "Молоко и молочные продукты" Технического комитета по стандартизации ISO/TC 34 "Пищевые продукты" Международной организации по стандартизации (ISO) и Международной молочной федерацией (IDF) совместно с Международной ассоциацией химиков-аналитиков (AOAC International).
Официальные экземпляры международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и международных стандартов, на которые даны ссылки, имеются в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод определения активности щелочной фосфатазы в пастеризованном цельном молоке, частично обезжиренном молоке, обезжиренном молоке, сливках и ароматизированном молоке с применением хемилюминесцентного (EPAS) метода.
Метод применяется для молока и молочных напитков из коровьего молока, молока овец, буйволиц и коз.
Метод применяется для жидких проб, в которых после их подготовки (разбавления) активность щелочной фосфатазы составляет меньше 7000 миллиединиц на литр.
Примечание - Было проведено успешное совместное исследование с цельным коровьим молоком, молоком овец, буйволиц и коз, а также обезжиренным коровьим молоком (< 0,5% жирности), 20%-ными сливками и 2%-ным молочно-шоколадным напитком).
2 Термины и определения
В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
2.1 активность щелочной фосфатазы; ALP (alkaline phosphatase activity): Активность щелочной фосфатазы, содержащейся в продукте, определяемая в порядке, установленном в настоящем стандарте.
Примечание - Активность щелочной фосфатазы выражается в миллиединицах активности фермента на литр (мЕд/л) ([4], [5]).
2.2 единица активности щелочной фосфатазы (unit of alkaline phosphatase activity): Количество фермента щелочной фосфатазы, которое катализирует преобразование 1 мкмоль стабильного ароматического субстрата за минуту.
3 Сущность метода
Активность щелочной фосфатазы измеряют посредством фотоактивации гидролизованного продукта с последующим инструментальным измерением фотоактивации. В присутствии щелочной фосфатазы стабильный ароматический субстрат диоксетан-фосфата гидролизуют при температуре (35 +/- 1) °C для получения фотоактивированного (хемилюминесцентного) продукта. Фотоактивацию продукта усиливают с помощью макромолекулярного повышающего компонента. Реакцию гидролиза останавливают после определенного времени инкубации (3 мин). Количество образовавшегося хемилюминесцентного продукта измеряют и преобразуют в ферментные единицы с помощью люминометра. Градуировка люминометра основана на использовании таблеток с известной ферментной активностью.
4 Реактивы
В ходе анализа используют реактивы только признанной аналитической чистоты, если не установлены другие требования, и дистиллированную, деминерализованную воду или воду эквивалентной чистоты.
4.1 Субстрат нехемилюминесцентного эфира диоксетана [0,2 моль/л 3-(2'-спироадамантанан)-4-метокси-4-(3"-фосфат фенил-1,2 диоксетана динатриевой соли в DEAE-буфере с 1% флуорозина] имеется в продаже [например, жидкий реактив Charm AP <1>].
--------------------------------
<1> Реактивы, указанные в разделе 4, и оборудование, указанное в 5.1, доступны у I Charm Sciences Inc., 659 Andover St., Lawrence, MA 01843, USA (США). Они являются примерами подходящих продуктов, доступных в продаже. Эта информация приводится для удобства пользователей настоящего стандарта и не является рекламой указанных продуктов со стороны ISO или IDF. Могут быть использованы эквивалентные продукты, если они обеспечивают получение аналогичных результатов.
Рекомендуется хранить субстрат при температуре 0 °C - 7 °C. При хранении в пластиковых пробирках янтарного цвета и при температуре 4 °C субстрат остается стабильным в течение 6 мес. При хранении при температуре 30 °C субстрат сохраняет стабильность только в течение 24 ч.
При испытаниях используемый субстрат хранят при температуре 0 °C - 7 °C или во льду.
4.2 Останавливающий раствор
Останавливающий раствор подготавливают, смешивая одинаковое количество 0,15 моль/л 2-амино-2-метил-1-пропанола и 0,02% бензалкония хлорида с pH 10,7. До использования останавливающий раствор должен находиться при комнатной температуре 18 °C - 24 °C. Для проверки стабильности раствора, использованного при градуировке, если не используют термозонд, фиксируют и поддерживают температуру в пределах 0,5 °C.
Примечание - Останавливающий раствор используют для остановки ферментного гидролиза субстрата эфира диоксетана (4.1).
Имеющийся в продаже останавливающий раствор имеет срок годности 1 год при хранении при температуре 4 °C или 2 мес при хранении при комнатной температуре. При ежедневном использовании его рекомендуется хранить при комнатной температуре.
4.3 Рабочие градуировочные средства, например градуировочные таблетки (сухое пастеризованное молоко с измеренным содержанием фосфатазы в виде таблеток для регидратации в молоке) с активностью фосфатазы 875 +/- 26 мкЕд/л. Таблетки регидратируют в трех различных объемах напитка на основе молока, не содержащего активной фосфатазы, или в отрицательной пробе для испытания (7.2) для создания стандартной градуировочной кривой.
Имеющиеся в продаже градуировочные таблетки хранят при температуре 4 °C в течение 2 лет.
4.3.1 Градуировочные средства для жидких неокрашенных молочных продуктов
В каждой из трех пробирок (5.9) вместимостью 50 мл с отметками A1, B1 и C1 соответственно растворяют одну градуировочную таблетку в 100 мкл дистиллированной воды.
В пробирку A1 добавляют 20 мл, в пробирку B1 - 5 мл, в пробирку C1 - 2,5 мл жидкого молочного продукта белого цвета (не содержащего активной фосфатазы) или отрицательную пробу для испытания (7.2). Получают градуировочные стандарты A1, B1 и C1 с активностью фосфатазы A1 = 44 мЕд/л, B1 = 175 мЕд/л и C1 = 350 мЕд/л соответственно. Пробирки закрывают колпачками и энергично встряхивают их содержимое. Для регидратации содержимого пробирки выдерживают ее в холодильнике в течение 10 мин. Тщательно перемешивают перед применением.
4.3.2 Градуировочные средства для сливок и ароматизированного молока
В каждой из трех пробирок (5.9) вместимостью 50 мл с отметками A2, B2 и C2 соответственно растворяют по одной градуировочной таблетке в 100 мкл дистиллированной воды.
В пробирку A2 добавляют 10 мл, в пробирку B2 - 5 мл, в пробирку C2 - 2,5 мл сливок или ароматизированного молока (не содержащих активной фосфатазы) или отрицательную пробу для испытания (7.2). Получают градуировочные стандарты A2, B2 и C2 с активностью фосфатазы A2 = 88 мЕд/л, B2 = 175 мЕд/л и C2 = 350 мЕд/л соответственно. Пробирки закрывают колпачками и энергично встряхивают их содержимое. Для регидратации содержимого пробирки выдерживают ее в холодильнике в течение 10 мин. Тщательно перемешивают перед применением.
4.4 Положительная контрольная проба
В качестве положительной контрольной пробы используют лиофилизированную щелочную фосфатазу в колбе янтарного цвета вместимостью 15 мл.
Для просмотра документа целиком скачайте его >>>
