Утвержден и введен в действие
Приказом Федерального
агентства по техническому
регулированию и метрологии
от 13 декабря 2011 г. N 944-ст
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ
МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА БАКТЕРИЙ
ВИДА PSEUDOMONAS AERUGINOSA
Food products. Methods for detection and quantity
determination of Pseudomonas aeruginosa bacteria
ГОСТ Р 54755-2011
Группа Н09
ОКС 07.100.30;
ОКСТУ 9109
Дата введения
1 января 2013 года
Предисловие
Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения".
Сведения о стандарте
1. Разработан Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИКОП Россельхозакадемии).
2. Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытания агропромышленной продукции на безопасность".
3. Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 13 декабря 2011 г. N 944-ст.
4. Введен впервые.
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет.
1. Область применения
Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления бактерий вида Pseudomonas aeruginosa и методы определения их количества:
- метод наиболее вероятного числа (НВЧ);
- метод посева на агаризованные селективно-диагностические среды - подсчет колоний.
Метод определения НВЧ предусмотрен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта не более 1500 или в 1 см3 жидкого продукта не более 150 клеток бактерий вида Pseudomonas aeruginosa.
Метод определения количества посевом на агаризованные селективно-диагностические среды предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта не менее 1500 или в 1 см3 жидкого продукта не менее 150 КОЕ бактерий вида Pseudomonas aeruginosa.
2. Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р ИСО 7218-2008. Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям
ГОСТ Р ИСО 11133-1-2008. Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории
ГОСТ Р ИСО 11133-2-2008. Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 2. Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культуральных сред
ГОСТ Р 53228-2008. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
ГОСТ Р 54004-2010. Продукты пищевые. Методы отбора проб для микробиологических испытаний
ГОСТ 6672-75. Стекла покровные для микропрепаратов. Технические условия
ГОСТ 6709-72. Вода дистиллированная. Технические условия.
ГОСТ 9284-75. Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия
ГОСТ 10444.1-84. Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе
ГОСТ 25336-82. Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26669-85. Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов
ГОСТ 26670-91. Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов
ГОСТ 29228-91 (ИСО 835-2-81). Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 2. Пипетки градуированные без установленного времени ожидания
ГОСТ 30425-97. Консервы. Метод определения промышленной стерильности.
Примечание. При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3. Термины и определения
В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
3.1. Бактерии вида Pseudomonas aeruginosa: аэробные грамотрицательные бактерии, которые образуют типичные колонии на агаризованных селективно-диагностических средах за счет образования пигментов (пиоционина и флюоресцина), дают положительную реакцию на оксидазу, типичные по биохимическим признакам, если испытания проводятся в соответствии с методами, установленными в настоящем стандарте.
3.2. Выявление бактерий вида Pseudomonas aeruginosa: определение присутствия или отсутствия бактерий вида Pseudomonas aeruginosa в определенной массе или объеме продукта в соответствии с настоящим стандартом.
3.3. Определение количества бактерий вида Pseudomonas aeruginosa:
3.3.1. Количество бактерий, содержащееся в 1 см3 или 1 г продукта, определенное путем посева продукта и (или) его разведений на агаризованную селективно-диагностическую среду, подсчете после инкубирования при температуре 37 °C типичных колоний и подтверждении по отношению к окраске по Граму, присутствию оксидазы, образованию пигментов и по биохимическим признакам принадлежности бактерий из этих колоний к бактериям вида Pseudomonas aeruginosa. Подтверждение проводят по методам, приведенным в настоящем стандарте.
3.3.2. Количество бактерий, содержащееся в 1 см3 или 1 г продукта, определенное по методу НВЧ, указанному в настоящем стандарте.
4. Метод выявления и определения количества бактерий вида
Pseudomonas aeruginosa по методу НВЧ
Сущность методов
Метод выявления и определения НВЧ бактерий вида Pseudomonas aeruginosa основан на высеве определенного количества продукта и (или) разведений пробы продукта в жидкую неселективную среду, инкубировании посевов, пересеве культуральной жидкости на поверхность агаризованной селективно-диагностической среды для подтверждения по биохимическим и культуральным признакам роста принадлежности выделенных типичных колоний к бактериям вида Pseudomonas aeruginosa.
4.1. Метод выявления бактерий вида Pseudomonas aeruginosa
4.1.1. Предварительное обогащение в неселективной среде
В триптон-соевый бульон, приготовленный по 6.1, или сердечно-мозговой бульон, приготовленный по 6.2, высевают анализируемую пробу, затем посевы инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 2) ч.
4.1.2. Выделение типичных колоний
На поверхность агаризованной селективно-диагностической среды высевают культуру, полученную по 4.1.1, посевы инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C.
Посевы просматривают через (24 +/- 2) ч для определения присутствия колоний, типичных для бактерий вида Pseudomonas aeruginosa.
4.1.3. Подтверждение принадлежности выделенных типичных колоний к бактериям вида Pseudomonas aeruginosa
Типичные колонии, полученные по 4.1.2, пересевают на поверхность питательного агара для дальнейшего подтверждения принадлежности выделенных культур к бактериям вида Pseudomonas aeruginosa.
4.1.4. Схема выявления бактерий вида Pseudomonas aeruginosa приведена в Приложении А.
4.2. Определение количества бактерий вида Pseudomonas aeruginosa
4.2.1. Предварительное обогащение в неселективной среде
В каждую из трех колб с 90 см3 одной из неселективных сред по 4.1.1 вносят по 10 см3 продукта, если продукт жидкий, или вносят по 10 см3 исходного разведения продукта, приготовленного по ГОСТ 26669, в случае, если анализируемый продукт другой консистенции.
В каждую из трех пробирок с 9 см3 одной из неселективных сред по 4.1.1 вносят по 1 см3 продукта, если исходный продукт жидкий, или вносят по 1 см3 исходного разведения (указанного выше) продукта в случае, если анализируемый продукт другой консистенции.
В каждую из трех пробирок с 9 см3 одной из неселективных сред по 4.1.1 вносят по 1 см3 первого десятикратного разведения продукта, если исходный продукт жидкий, или вносят по 1 см3 первого десятикратного исходного разведения продукта в случае, если анализируемый продукт другой консистенции.
Посевы инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 2) ч.
Выбор объема пробы для анализа или ее разведения зависит от предполагаемой обсемененности продукта или от нормативных значений.
4.2.2. Выделение типичных колоний, подтверждение принадлежности выделенных типичных колоний к бактериям вида Pseudomonas aeruginosa
Выделение типичных колоний, подтверждение принадлежности выделенных типичных колоний к бактериям вида Pseudomonas aeruginosa проводят по 4.1.2 и 4.1.3.
4.2.3. Схема определения количества бактерий вида Pseudomonas aeruginosa по методу НВЧ приведена в Приложении А.
4.2.4. Наиболее вероятное число бактерий вида Pseudomonas aeruginosa в 1 см3 или 1 г пробы продукта (НВЧ) рассчитывают исходя из числа посевов, в которых подтверждено присутствие этих бактерий. Определение наиболее вероятного числа бактерий вида Pseudomonas aeruginosa проводят в соответствии с Приложением Б (таблица Б.1).
5. Метод определения количества бактерий вида
Pseudomonas aeruginosa посевом на агаризованные
селективно-диагностические среды - подсчет колоний
Для просмотра документа целиком скачайте его >>>
