Утвержден и введен в действие
Приказом Федерального
агентства по техническому
регулированию и метрологии
от 23 сентября 2014 г. N 1175-ст
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
СРЕДСТВА ЛЕКАРСТВЕННЫЕ БИОЛОГИЧЕСКИЕ
ДЛЯ ВЕТЕРИНАРНОГО ПРИМЕНЕНИЯ
ВЫЯВЛЕНИЕ ДНК МИКРООРГАНИЗМОВ РОДА MYCOPLASMA
МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ (ПЦР)
Medicine biological remedies for veterinary use.
Polymerase chain reaction for the Mycoplasma DNA detection
ГОСТ Р 56140-2014
ОКС 11.220
Дата введения
1 января 2016 года
Предисловие
1. Разработан Федеральным государственным бюджетным учреждением "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГБУ "ВГНКИ").
2. Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 454 "Охрана жизни и здоровья животных и ветеринарно-санитарная безопасность продуктов животного происхождения и кормов".
3. Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 23 сентября 2014 г. N 1175-ст.
4. Введен впервые.
Правила применения настоящего стандарта установлены в ГОСТ Р 1.0-2012 (раздел 8). Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (gost.ru).
1. Область применения
Настоящий стандарт распространяется на биологические лекарственные средства для ветеринарного применения - живые вакцины, сыворотки крови, гипериммунные сыворотки - и устанавливает метод выявления ДНК микроорганизмов рода Mycoplasma методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Настоящий метод также может быть применен для культуры клеток.
2. Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ OIML R 76-1-2011 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 3164-78 Масло вазелиновое медицинское. Технические условия
ГОСТ 5962-2013 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ ИСО/МЭК 17025-2006 Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий
ГОСТ 21400-75 Стекло химико-лабораторное. Технические требования. Методы испытаний
ГОСТ 24760-81 Халаты медицинские женские. Технические условия
ГОСТ 25194-82 Халаты медицинские мужские. Технические условия
ГОСТ 26678-85 Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия
ГОСТ 27025-86 Реактивы. Общие указания по проведению испытаний
ГОСТ 28311-89 Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний
ГОСТ 31719-2012 Продукты пищевые и корма. Экспресс-метод определения сырьевого состава (молекулярный)
ГОСТ 31929-2013 Средства лекарственные для ветеринарного применения. Правила приемки, методы отбора проб
ГОСТ IEC 60335-2-25-2012 Безопасность бытовых и аналогичных электрических приборов. Часть 2.25. Частные требования для микроволновых печей, включая комбинированные микроволновые печи
ГОСТ Р 52173-2003 Сырье и продукты пищевые. Метод идентификации генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения
ГОСТ Р 52239-2004 (ИСО 11193-1) Перчатки медицинские диагностические одноразовые. Часть 1. Спецификация на перчатки из каучукового латекса или раствора
ГОСТ Р 52833-2007 Микробиология пищевой продукции и кормов для животных. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) для определения патогенных микроорганизмов. Общие требования и определения
ГОСТ Р 55576-2013 Корма и кормовые добавки. Метод качественного определения регуляторных последовательностей в геноме сои и кукурузы.
Примечание. При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.
3. Термины, определения и сокращения
3.1. В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 52833, ГОСТ 31719 и ГОСТ 31929, а также следующие термины с соответствующими определениями.
3.1.1. Taq-полимераза: фермент, участвующий в процессе построения цепей нуклеиновых кислот из нуклеотидов.
3.1.2. Элюция: процесс вымывания ДНК из твердого носителя (сорбента) с использованием растворителя.
3.2. В настоящем стандарте применены следующие сокращения:
а) дНТФ - раствор, содержащий нуклеотиды:
1) 2'-дезоксиаденозин-5'-трифосфорной кислоты тетранатриевую соль;
2) 2'-дезоксицитидин-5'-трифосфорной кислоты тетранатриевую соль;
3) 2'-дезоксигуанин-5'-трифосфорной кислоты тетранатриевую соль;
4) 2'-дезокситимидин-5'-трифосфорной кислоты тетранатриевую соль;
б) ОКО - контрольный образец этапа экстракции;
в) ПКО - положительный контрольный образец, содержащий ДНК микроорганизмов рода Mycoplasma;
г) ПЦР - полимеразная цепная реакция;
д) ПЦР-буфер - реакционный буфер для проведения ПЦР;
е) ТБЕ-буфер - трис-боратный буфер;
ж) п. н. - пара нуклеотидов;
и) ЭДТА - этилендиаминтетраацетат.
4. Сущность метода
Сущность метода ПЦР заключается в амплификации специфического участка ДНК микроорганизмов рода Mycoplasma за счет многократного повторения циклов денатурации ДНК в исследуемой пробе, отжига специфических олигонуклеотидных праймеров и синтеза комплементарных цепей ДНК с помощью фермента Taq-полимеразы. Наличие ДНК микроорганизмов рода Mycoplasma в исследуемой пробе определяют по появлению специфичной полосы амплифицированной ДНК длиной 509 п. н., просматриваемой на электрофореграмме.
5. Условия выполнения исследований
и требования безопасности
При выполнении исследований следует соблюдать условия и требования безопасности, установленные в ГОСТ Р 52833 и ГОСТ Р 55576-2013 (раздел 4, приложение А).
Примечание. Работу с микроорганизмами I - IV групп патогенности проводят в соответствии с требованиями [1], [2] и [3].
6. Средства измерений, оборудование,
материалы, реактивы и посуда
6.1. Общие требования - по ГОСТ ИСО/МЭК 17025.
6.2. Для проведения исследований применяют:
- микроцентрифугу-встряхиватель со скоростью вращения до 2000 об/мин;
- холодильник бытовой электрический компрессионный по ГОСТ 26678 с диапазоном температур от 2 °C до 8 °C и с морозильной камерой с температурой не более минус 16 °C;
- микропробирки одноразовые полипропиленовые вместимостью 0,5 или 0,2 см3 и завинчивающиеся или плотно закрывающиеся вместимостью 1,5 см3;
- набор дозаторов электронных или механических лабораторных медицинских по ГОСТ 28311 или переменного объема по ГОСТ Р 52173 (пункт 4.14);
- наконечники одноразовые для лабораторных медицинских дозаторов переменного объема с аэрозольным барьером вместимостью до 200 мм3 и до 1000 мм3;
- наконечники одноразовые для лабораторных медицинских дозаторов переменного объема до 200 мм3;
- штативы для микропробирок и наконечников;
- халаты медицинские по ГОСТ 24760 и 25194;
- перчатки медицинские диагностические одноразовые из латекса по ГОСТ Р 52239;
- контейнеры для сброса использованных наконечников и пробирок.
6.3. Для выделения (экстракции) ДНК применяют:
- бокс ламинарный, класс биологической безопасности II, тип А;
- термостат твердотельный для микропробирок, рассчитанный на температуру от 25 °C до 100 °C;
- отсасыватель медицинский вакуумный с колбой-ловушкой для удаления надосадочной жидкости;
- микроцентрифугу для микропробирок со скоростью вращения до 16000 об/мин;
- растворы дезинфицирующие, вызывающие деградацию ДНК;
- спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962;
- комплект реагентов для выделения ДНК:
раствор лизирующий (48%-ный гуанидин тиоцианат, Трис-HCl молярной концентрации 0,01 моль/дм3, ЭДТА молярной концентрации 0,0125 моль/дм3, 0,5%-ный
Для просмотра документа целиком скачайте его >>>
